Повышение фактора 8. Торговые названия препаратов с действующим веществом фактор свертывания крови VIII

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Вводится впервые

Настоящая фармакопейная статья распространяется на методы определения активности факторов системы свертывания крови человека I, II, VII, VIII, IX, X, XI, фактора Виллебранда, антитромбина III в плазме и препаратах крови.

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

Определение активности факторов свертывания базируется на 2 подходах:

1. Одностадийный метод. Восстановление процесса свертывания крови в дефицитной по фактору плазме после добавления препарата этого фактора (клоттинговый метод).
2. Двухстадийный метод. На первой стадии с использованием специфического кофактора активируется протеолитическая активность фактора II или фактора X с образованием соответственно активированного фактора IIa или Xa. На второй стадии количество образовавшегося активированного фaктора определяют по реакции расщепления им специфического хромогенного пептида (хромогенный метод).

Возможно проведение хромогенного метода 2 способами: по кинетике образования хромогена под действием активированного фактора или по конечной точке накопления хромогена за определенное время инкубации.

Для проведения обоих методов возможно использование пластиковых пробирок, планшетов, оптико-механических, механических полуавтоматических и полностью автоматизированных коагулометров.

Во всех методах расчет активности производят при сравнении активности тестируемого образца с активностью Международного стандарта NIBSC или вторичного стандартного образца фактора свертывания, откалиброванного относительно международного стандарта в международных единицах активности (МЕ). Эквивалентность международного стандарта в МЕ устанавливается ВОЗ. За 1 МЕ (100%) принимают активность фактора свертывания в 1,0 мл свежей нормальной пулированной плазме крови от 300 доноров. Активность может быть выражена в МЕ/мл, МЕ/флакон, МЕ/мг белка и в % от заявленного производителем количества.

ФАКТОРЫ

Фактор I (фибриноген)

Клоттинговый метод

Определение активности фибриногена проводят методом Клаусса.

Принцип метода

При добавлении тромбина к образцу, содержащему фибриноген, наблюдается образование сгустка фибрина. При использовании тромбина с высокой активностью (~10 МЕ/мл) и образцов с низкой концентрацией фибриногена (ниже 100 мг/дцл) можно получить линейную зависимость.

Для определения фибриногена используют коммерческие тестовые системы, в состав которых входит реагент тромбина, содержащий ингибитор гепарина, и буфер для разведения образцов или коммерческий тромбин-реагент.

Концентрация фибриногена выражается в мг/дцл. Для построения калибровочного графика используют стандартный образец фибриногена или аттестованную по международному стандарту плазму-калибратор. Стандартный образец или образец плазмы-калибратора растворяют в дистиллированной воде согласно инструкции. Готовят 5 последовательных разведений стандартного образца, начиная с концентрации ~ 100 мг/дцл, с помощью буфера для разведения образцов pH = 7,3±0,1. Анализ проводят при температуре 37°С согласно инструкции к набору. Для каждого разведения трижды определяют время образования сгустка. По полученным результатам в логарифмических координатах строят калибровочный график зависимости времени образования сгустка от концентрации фибриногена.

Готовят 2 разведения испытуемого образца с концентрацией ниже 100 мг/дцл. Для каждого разведения время образования сгустка определяют трижды. Количество фибриногена в каждом разведении определяют по калибровочному графику.

Фактор II (тромбин)

1. Клоттинговый метод

Определение активности фактора II проводят с использованием в качестве субстрата человеческой плазмы, дефицитной по фактору II. Процесс свертывания активируется добавлением к смеси кальция тромбопластина.

Для разведения стандарта и препаратов используют NaCl-имидазоловый буфер pH 7,3±0,1 с добавлением 0,1% бычьего или человеческого альбумина. Для построения калибровочного графика готовят серию последовательных разведений стандарта фактора II в интервале активности от 0,3 до 1 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации менее 1 МЕ/мл. Анализируют 3 разведения препарата. Для каждого образца измерение времени свертывания проводят минимум 2 раза. Измерение проводят в течение 1 ч после разведения препарата.

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку вносят 50 мкл плазмы, дефицитной по фактору II, и 50 мкл разведения стандарта или препарата. Смесь инкубируют при (37 ± 0,5)°С в течение 120 – 240 с. Время свертывания определяют с момента добавления к смеси 200 мкл предварительно нагретого до температуры (37±0,5)°С кальция тромбопластина. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции.

Калибровочный график строят в полулогарифмических координатах. По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора II, по оси ординат – время свертывания соответствующих разведений стандарта. Активность фактора II для каждого разведения испытуемого образца находят по калибровочному графику. Активность FII (А

k

1. Хромогенный метод

Метод основан на сравнении ферментативной активности фактора IIа, образованного после специфической активации фактора II, в отношении специфического хромогенного пептидного субстрата с такой же активностью стандартного образца (международного или аналогичного).

Фактор II активируется с помощью активатора экарина, выделенного из яда гадюки. Активированный фактор II (тромбин) селективно расщепляет хромогенный субстрат (H-D-фенилаланин-L-пипеколил-L-аргинин-4-нитроанилида дигидрохлорид, 4-толуолсульфонилглицил-пролил-L-аргинин-4-нитроанилид, H-D-циклогексилглицил-α-аминобутирил-L-аргинин-4-нитроанилид, D-циклогексилглицил-L-аланил-L-аргинин-4-нитроанилида диацетат) с образованием п -нитроанилина. Кинетику реакции исследуют фотометрическим методом при 405 нм. При этом значение оптической плотности пропорционально активности фактора II.

Определение фактора II хромогенным методом осуществляют с помощью специальных тестовых наборов. Анализ выполняется в соответствии с инструкцией к набору. Стандартный образец и препарат предварительно разводят плазмой, дефицитной по фактору II, до концентрации ~ 1 МЕ/мл (основное разведение). Из основного разведения готовят 3 разведения стандартного образца и 3 разведения препарата трис-солевым буферным раствором рН 8,4. Каждое разведение стандартного образца определяют двухкратно, полученные значения используют для построения калибровочного графика. Испытуемые образцы определяют трехкратно.

Испытания проводят в ручном режиме с использованием микропланшет и спектрофотометра, поддерживающего температуру в диапазоне (37±0,5)°C или в автоматическом режиме с использованием коагулометра.

Для проведения испытаний в ручном режиме в лунки микропланшета вносят по 25 мкл каждого разведения испытуемого препарата или стандартного образца. В каждую лунку прибавляют по 125 мкл буфера для разведения, по 25 мкл экарина и инкубируют при температуре (37±0,5)°C в течение 2 мин. По истечении времени инкубации в каждую лунку вносят по 25 мкл хромогенного субстрата фактора IIа.

А /мин).

Если непрерывное измерение оптической плотности невозможно, определяют оптическую плотность при длине волны 405 нм через последовательные интервалы времени (например, через 40 с) и строят график зависимости оптической плотности от времени и рассчитывают ∆А А

1. Тест на отсутствие тромбина

Для испытаний готовят восстановленный в соответствии с инструкцией раствор препарата. При наличии в препарате гепарина его нейтрализуют добавлением протамина сульфата из расчета 10 мкг протамина сульфата на 1 МЕ гепарина.

Приготовление раствора фибриногена

0,3 г фибриногена растворяют в 100 мл, перемешивают и выдерживают 15 – 20 мин при комнатной температуре.

Срок хранения раствора 1 мес при температуре от 2 до 8°С.

Приготовление раствора тромбина

Лиофилизат растворяют в соответствии с инструкцией производителя, выдерживают 15 – 20 мин при комнатной температуре и разводят 0,9% раствором натрия хлорида до содержания тромбина 1 МЕ/мл.

Срок хранения раствора 6 мес при температуре минус 20°С. Раствор после оттаивания повторному замораживанию не подлежит.

Ход определения

В 2 пробирки вносят равные объемы восстановленного препарата и раствора фибриногена. В третью пробирку (контрольная проба) вносят равные объемы раствора тромбина и раствора фибриногена, перемешивают содержимое пробирок вращательными движениями. Одну пробирку с восстановленным препаратом инкубируют на водяной бане с температурой 37°C в течение 6 ч, другую пробирку с восстановленным препаратом – при комнатной температуре в течение 24 ч. Отмечают наличие или отсутствие коагуляции (сгустка).

Контрольную пробу инкубируют на водяной бане при температуре 37°C и отмечают время образования сгустка.

Критерием приемлемости результатов является коагуляция в контрольной пробе через 30 с.

Фактор VII

1. Клоттинговый метод

Определение активности фактора VII проводят с использованием человеческой плазмы, дефицитной по фактору VII. Процесс свертывания активируется добавлением к смеси кальция тромбопластина.

Для разведения стандарта и препаратов используют NaCl-имидазоловый буфер pH 7,3 с добавлением 0,1% раствора альбумина человеческого или бычьего. Для построения калибровочного графика готовят серию последовательных разведений стандарта образца фактора VII в интервале от 0,3 до 1 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации менее 1 МЕ/мл. Анализируют 3 разведения препарата. Для каждого образца измерение времени свертывания проводят минимум 2 раза. Измерение проводят непосредственно после разведения препарата.

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку вносят 50 мкл плазмы, дефицитной по фактору VII и 50 мкл разведения стандарта или препарата. Смесь инкубируют при (37±0,5)°С в течение 120 – 240 с. Время свертывания определяют с момента добавления к смеси 200 мкл предварительно прогретого до температуры (37±0,5)°С кальция тромбопластина. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции.

Калибровочный график строят в полулогарифмических координатах. По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора VII, по оси ординат – время свертывания соответствующих разведений стандарта. Активность фактора VII для каждого разведения испытуемого образца находят по калибровочному графику. Активность FVII (А ) в исследуемом образце рассчитывают по формуле:

— активность соответствующего разведения исследуемого образца, найденная по калибровочному графику;

k — разведение исследуемого образца.

1. Хромогенный метод

В присутствии тканевого фактора (TF) и ионов Ca 2+ происходит активация фактора VII (образование FVIIa). Комплекс FVIIa, TF, Ca 2+ и фосфолипида активирует фактор X. Активированный фактор X (FXa) селективно расщепляет хромогенный субстрат FXa-1 метоксикарбонил-D-циклогексилаланил-глицил-L-аргинин-n -нитроанилид-ацетат с образованием п -нитроанилина. Исследование образца проводят фотометрическим методом при 405 нм. Значение оптической плотности (или увеличение поглощения) пропорционально количеству фактора VII.

Определение фактора VII хромогенным методом осуществляют с помощью специальных тестовых наборов. Анализ выполняется в соответствии с инструкцией к набору. Стандартный образец и препарат предварительно разводят плазмой, дефицитной по фактору VII, до концентрации ~ 1 МЕ/мл (основное разведение). Из основного разведения готовят с помощью буферного раствора 3 разведения стандартного образца и 3 разведения препарата трис-солевым буфером рН 7,3 – 8,0 с добавлением 0,1% человеческого или бычьего альбумина. Каждое разведение стандартного образца определяют двухкратно, полученные значения используют для построения калибровочного графика. Испытуемые образцы определяют трехкратно.

В лунки микропланшет вносят разведения испытуемого препарата или стандартного образца, добавляют кальций-тромбопластиновую смесь, раствор фактора Х и инкубируют при температуре (37± 0,5)°C от 2 до 5 мин, после чего вносят раствор хромогенного субстрата фактора Ха.

Измеряют изменение оптической плотности при длине волны 405 нм либо в кинетическом режиме, либо прерывают реакцию гидролиза через 3 — 15 мин добавлением 20% (об/об) раствора уксусной кислоты ледяной и измеряют оптическую плотность.

Фактор VIII

1. Клоттинговый метод

Определение активности фактора VIII проводят с использованием человеческой плазмы, дефицитной по фактору VIII. Источником фосфолипидов, необходимых для осуществления свертывания, является АЧТВ-реагент.

Для разведения стандарта и препаратов используют NaCl-имидазоловый буферный раствор pH (7,3±0,1), с добавлением 0,1% раствора человеческого или бычьего альбумина. Для построения калибровочного графика готовят серию последовательных разведений стандарта, начиная от концентрации 2 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации ~ 0,5 – 2 МЕ/мл. Анализируют 3 разведения препарата. Для каждого образца измерение времени свертывания проводят минимум 2 раза. Измерение проводят в течение 1 ч после разведения препарата.

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку вносят 100 мкл плазмы, дефицитной по фактору VIII, 100 мкл разведения стандарта или препарата и 100 мкл АЧТВ-реагента и инкубируют при температуре (37±0,5)°С в течение 2 мин. Время свертывания фиксируют с момента прибавления к смеси 100 мкл предварительно прогретого до температуры (37 ± 0,5)°С 0,025 М раствора кальция хлорида. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции.

Калибровочный график строят в полулогарифмических координатах. По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора VIII, по оси ординат – время свертывания соответствующих разведений стандарта. Активность фактора VIII для каждого разведения испытуемого образца находят по калибровочному графику. Активность FVIII (А ) в исследуемом образце рассчитывают по формуле:

— активность соответствующего разведения исследуемого препарата, найденная по калибровочному графику;

k — разведение исследуемого образца.

1. Хромогенный метод

Количественное определение фактора VIII проводят с помощью набора реактивов, в котором фактор VIII является кофактором для фактора IХа при активации фактора Х в форму Ха, расщепляющего хромогенный субстрат.

Принцип метода

В присутствии ионов Са 2+ и фосфолипидов фактор Х под действием фактора IХа активируется в Ха. При избытке фактора Х и оптимальных количеств Са 2+ , фосфолипидов и фактора IХа скорость активации фактора Х линейно зависит от количества фактора VIII. Фактор Ха гидролизует хромогенный субстрат S-2765 (N-a-Z-DArg-Gly-Arg-pNA) с высвобождением хромогенной группы pNA, окраску которой регистрируют спектрофотометрически при 405 нм. Количество образовавшегося фактора Ха и, следовательно, интенсивность окрашивания, пропорциональны активности фактора VIII в образце.

Набор реактивов для определения активности фактора VIII стабилен в течение срока, указанного производителем при температуре хранения от 2 до 8 о С.

Набор реактивов содержит:

1. 7,7 мг хромогена S-2765 с добавкой синтетического ингибитора тромбина I-2581. Реактив восстанавливают в 6,0 мл стерильной воды для инъекций. Восстановленный раствор стабилен в течение 1 мес при температуре от 2 до 8°С. Перед использованием нагревают до температуры 37°С.
2. Реактив бычьих факторов: 0,3 Ед фактора IХ, 2,7 МЕ фактора Х и 1 NIH Ед тромбина, лиофилизированных в присутствии 40 ммоль СаCl 2 и 0,2 ммоль фосфолипидов. Реактив восстанавливают в 2,0 мл стерильной воды для инъекций. Восстановленный раствор стабилен в течение 12 ч при температуре от 2 до 8 о С, 2 нед при температуре минус 30 о С и 1 мес при температуре минус 80 о С. Не следует хранить при температуре минус 20 о С. Перед использованием нагревают до температуры 37 о С.
3. Концентрат ×10 трис-буфера. Стабилен в течение 1 мес при температуре от 2 до 8°С. Перед употреблением разводят стерильной водой для инъекций в соотношении 1:10.

Дополнительные реактивы:

1. Международный стандартный образец — раствор концентрата фактора свертывания VIII человека (NIBSC, Eur.Pharm.Ref.Std. BRP H 0920000) или плазма, откалиброванная по международному стандарту фактора VIII.
2. Контрольная нормальная или патологическая плазма, откалиброванная по международному стандарту фактора VIII.
3. 0,9% раствор натрия хлорида.
4. 20% уксусная кислота или 2% лимонная кислота (используются в методике конечной точки накопления хромогена).
5. Вода лабораторная деионизованная

Оборудование:

1. Пластиковые пробирки;
2. Микропланшеты;
3. Термостат 37 о С;
4. Спектрофотометр 405 нм или ридер микропланшет 405 нм;
5. Калиброванные пипетки;
6. Вортекс;
7. Секундомер.

Исследуемый образец перед определением разводят до ожидаемой активности 1 МЕ/мл.

Определение можно проводить в кинетическом режиме и по конечной точке, в пробирках (макрометод) и в микропланшетах (микрометод).

Калибровка

При проведении каждого определения проводят построение калибровочной кривой. Разведение стандартного образца готовят в 2 этапа: предварительное разведение до активности 1 — 2 МЕ/мл и конечные разведения для построения калибровочной зависимости в диапазоне 0 – 2 МЕ/мл. После разведения определение следует провести в течение 30 мин.

Ход определения

Определение в пробирках

200 мкл разбавленного стандартного, контрольного или исследуемого образца вносят в пробирки, инкубируют в течение 3-4 мин при температуре 37 о С, прибавляют 50 мкл предварительно прогретого реактива факторов, инкубируют в течение 2-4 мин при температуре 37 о С и прибавляют 50 мкл раствора хромогена.

Определение в микропланшетах

В лунки микропланшета вносят по 50 мкл разбавленного стандартного, контрольного или исследуемого образца, инкубируют в течение 3-4 мин при 37°С, прибавляют 50 мкл предварительно прогретого реактива факторов, инкубируют в течение 2-4 мин при температуре 37 о С и прибавляют 50 мкл раствора хромогена.

Кинетический метод определения

После прибавления раствора хромогена в течение 2 — 10 мин измеряют изменение оптической плотности раствора при 405 нм.

Определение по конечной точке

После прибавления раствора хромогена смесь продолжают инкубировать при температуре 37 о С в течение 2 — 10 мин, после чего для остановки реакции прибавляют 50 мкл 20% уксусной или 2% лимонной кислоты. Измеряют оптическую плотность раствора против буфера при 405 нм.

Расчеты

Строят зависимость изменения оптической плотности в минуту (для кинетического метода) или оптической плотности (для определения по конечной точке) разведений стандартного раствора от концентрации в них фактора VIII. Активность в исследуемом образце определяют по калибровочной кривой с учетом предварительного разведения образца.

Фактор IX

1. Клоттинговый метод

Определение активности фактора IX проводят с использованием человеческой плазмы, дефицитной по фактору IX. Источником фосфолипидов, необходимых для осуществления свертывания, является АЧТВ-реагент.

Для разведения стандарта и препаратов используют NaCl-имидазоловый буферный pH 7,3 с добавлением 0,1% раствора бычьего или человеческого альбумина. Для построения калибровочного графика готовят серию последовательных разведений стандарта в интервале от 0,3 до 1 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации менее 1 МЕ/мл. Анализируют 3 разведения препарата. Для каждого образца измерение времени свертывания проводят минимум 2 раза. Измерение проводят в течение 1 ч после разведения препарата.

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку вносят 100 мкл плазмы, дефицитной по фактору IX, 100 мкл разведения стандарта или препарата и 100 мкл АЧТВ-реагента и инкубируют при температуре (37± 0,5)°С в течение 2 мин. Время свертывания фиксируют с момента прибавления к смеси 100 мкл предварительно прогретого до температуры (37 ± 0,5) °С 0,025 М раствора кальция хлорида. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции.

Калибровочный график строят в полулогарифмических координатах. По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора IX, по оси ординат – время свертывания соответствующих разведений стандарта. Активность фактора IX для каждого разведения испытуемого образца находят по калибровочному графику. Активность FIX (А ) в исследуемом образце рассчитывают по формуле:

— активность соответствующего разведения исследуемого образца, найденная по калибровочному графику;

k — разведение исследуемого образца.

Фактор X

1. Клоттинговый метод

Определение активности фактора X проводят с использованием человеческой плазмы, дефицитной по фактору X. Процесс свертывания активируется добавлением к смеси кальция тромбопластина.

Для разведения стандарта и препаратов используют NaCl-имидазоловый буферный раствор pH 7,3 с добавлением 0,1% раствора человеческого или бычьего альбумина. Для построения калибровочного графика готовят серию последовательных разведений стандарта фактора X в интервале от 0,3 до 1 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации менее 1 МЕ/мл. Анализируют 3 разведения препарата. Для каждого образца измерение времени свертывания проводят минимум 2 раза. Измерение проводят непосредственно после разведения препарата.

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку вносят 50 мкл плазмы, дефицитной по фактору X, и 50 мкл разведения стандарта или препарата. Смесь инкубируют при (37±0,5)°С в течение 120 – 240 с. Время свертывания определяют с момента добавления к смеси 200 мкл предварительно прогретого до температуры (37±0,5)°С кальция тромбопластина. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции.

Калибровочный график строят в полулогарифмических координатах. По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора X, по оси ординат – время свертывания соответствующих разведений стандарта. Активность фактора X для каждого разведения испытуемого образца находят по калибровочному графику. Активность фактора X (А ) в исследуемом образце рассчитывают по формуле:

— активность соответствующего разведения исследуемого образца, найденная по калибровочному графику;

k — разведение исследуемого образца.

1. Хромогенный метод

Фактор X активируют с помощью полученного из змеиного яда FX-активатора. Активированный фактор X (FXa) селективно расщепляет хромогенный субстрат FXa-1 N-α-бензилоксикарбонил-D-аргинил-L-глицил-L-аргинин-4-нитроанилида дигидрохлорид, N-бензоил-L-изолейцил-L-глутамил-глицил-L-аргинин-4-нитроанилида гидрохлорид, метансульфонил-D-лейцил-глицил-L-аргинин-4-нитроанилид, метоксикарбонил-D-циклогексилаланил-глицил-L-аргинин-4-нитроанилида ацетат с образованием п -нитроанилина. Образцы исследуют фотометрическим методом при 405 нм. Количество фактора X пропорционально увеличению оптической плотности раствора.

Определение фактора X хромогенным методом осуществляют с помощью специальных тестовых наборов. Анализ выполняется в соответствии с инструкцией к набору. Стандартный образец и препарат предварительно разводят плазмой, дефицитной по фактору X, до концентрации ~ 1 МЕ/мл (основное разведение). Из основного разведения готовят с помощью буферного раствора 3 разведения стандартного образца (в соответствии с инструкцией) и 3 разведения препарата. Каждое разведение стандартного образца определяют двухкратно, полученные значения используют для построения калибровочного графика. Испытуемые образцы определяют трехкратно.

Испытания проводят в ручном режиме с использованием пластиковых пробирок или микропланшет при температуре (37±0,5)°C или в автоматическом режиме с использованием коагулометра.

Для проведения испытаний в ручном режиме в лунки микропланшета вносят по 12,5 мкл каждого разведения испытуемого препарата или стандартного образца, в каждую лунку прибавляют по 25 мкл специфического активатора фактора Х из яда гадюки Рассела и инкубируют при температуре (37±0,5)°C в течение 90 с, после чего в каждую лунку вносят по 150 мкл рабочего разведения хромогенного субстрата фактора Х.

Определяют скорость изменения оптической плотности при длине волны 405 нм непрерывно в течение 3 мин и рассчитывают среднюю скорость изменения оптической плотности (∆А /мин) или измеряют оптическую плотность при длине волны 405 нм через последовательные интервалы времени (например, через 30 с) и строят график зависимости оптической плотности от времени и рассчитывают ∆А /мин как угол наклона прямой. Из значений ∆А /мин каждого индивидуального разведения стандартного образца и испытуемого препарата рассчитывают активность испытуемого препарата.

Фактор Виллебранда

Определение активности фактора Виллебранда проводят методом агглютинации или иммуноферментным методом.

Активность фактора Виллебранда определяется путем сравнения его активности с активностью стандартного образца.

Метод агглютинации

Метод основан на определении коферментной активности фактора Виллебранда при агглютинации суспензии тромбоцитов в присутствии ристоцетина А.

Испытание может проводиться количественными методами с использованием автоматизированного оборудования или полуколичественным методом путем визуальной оценки агглютинации в серии разведений.

Полуколичественный метод

Из стандартного образца и восстановленного раствора препарата готовят последовательные разведения в 0,9% растворе натрия хлорида с 1–5% раствором альбумина человека до ожидаемого содержания фактора Виллебранда 0,5, 1,0 и 2,0 МЕ/мл. По 0,05 мл каждого разведения стандартного образца и исследуемого препарата наносят на предметное стекло, добавляют по 0,1 мл суспензии тромбоцитов с ристоцетином и перемешивают в течение 1 мин. В качестве отрицательного контроля используют раствор разведения. После 1 мин инкубации при комнатной температуре визуально оценивают агглютинацию тромбоцитов. Максимальное разведение, при котором происходит агглютинация тромбоцитов, является титром ристоцетиновой коферментной активности образца.

Количественный метод

Готовят не менее 2 серий последовательных разведений стандартного и испытуемого образцов с помощью буфера для разведения до ожидаемого содержания фактора Виллебранда 0,5, 1,0 и 2,0 МЕ/мл.

Определение проводят в соответствии с инструкцией производителя автоматизированного оборудования. Получают значения зависимости изменения оптического поглощения (степени мутности раствора) от активности фактора Виллебранда.

Определение содержания фактора Виллебранда в испытуемом препарате осуществляют с использованием коэффициентов линейного уравнения зависимости оптической плотности раствора от содержания фактора Виллебранда в стандартном образце.

Иммуноферментный метод

Метод основан на определении коллаген-связывающей активности фактора Виллебранда. При специфическом связывании фактора Виллебранда с фибриллами коллагена и последующем связывании поликлональных антител к фактору Виллебранда, конъюгированных с ферментом, после добавления хромогенного субстрата образуется хромофор, который может быть количественно определен спектрофотометрическим методом. Существует линейная зависимость между связыванием коллагена с фактором Виллебранда и оптической плотностью.

Определение проводят с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России в соответствии с инструкциями по применению.

Для испытаний готовят не менее 3 последовательных серий разведений стандартного и испытуемого образцов с помощью буфера для разведения до ожидаемого содержания фактора Виллебранда 1,0 МЕ/мл. Далее проводят испытания в соответствии с инструкцией производителя используемой тест-системы.

Активированные факторы свертывания крови

Определение проводят коагулометрическим методом.

Для испытаний готовят восстановленный раствор препарата. При наличии в препарате гепарина его нейтрализуют добавлением протамина сульфата из расчета 10 мкг протамина сульфата на 1 МЕ гепарина. Готовят разведения препарата 1:10 и 1:100 с помошью трис-буферного раствора рН 7,5.

В 3 пробирки вносят по 0,1 мл стандартной плазмы человека и по 0,1 мл раствора фосфолипидов, помещают в водяную баню с температурой (37±0,5)°C на 60 с, после чего в первую пробирку добавляют 0,1 мл трис-буферного раствора (контрольная проба), во вторую — 0,1 мл испытуемого препарата в разведении 1:10, в третью пробирку — 0,1 мл испытуемого препарата в разведении 1:100. Далее к содержимому каждой пробирки немедленно добавляют по 0,1 мл нагретого до температуры 37 о С раствора кальция хлорида 3,7 г/л. Отмечают время формирования сгустка от момента добавления раствора кальция хлорида.

Критерием приемлемости результатов является время коагуляции в контрольной пробе в интервале от 200 до 350 с.

Специфическая удельная активность

Специфическую активность факторов свертывания рассчитывают по формуле:

Определение активности антитромбина III

Хромогенный метод

Метод определения активности ATIII основан на его способности нейтрализовать тромбин в присутствии гепарина. К образцу, содержащему ATIII, добавляют избыточные количества гепарина и тромбина. Образующийся комплекс ATIII-гепарин нейтрализует количество тромбина, пропорциональное количеству ATIII. Оставшийся тромбин селективно расщепляет хромогенный субстрат с образованием п -нитроанилина, абсорбцию которого определяют при 405 нм. Таким образом, количество ATIII обратно пропорционально величине поглощения свободного п -нитроанилина в образце.

Определение активности ATIII проводят с помощью коммерческих тестовых систем. Для построения калибровочного графика используют стандартный образец ATIII или плазму-калибратор, аттестованную по международному стандарту. Стандартный образец или плазму-калибратор растворяют в дистиллированной воде согласно указаниям в инструкции. Зависимость величины оптической плотности от активности ATIII линейна в интервале активности ATIII от 0,1 до 1,0 МЕ/мл. Используя буфер с гепарином, готовят 4 разведения стандартного образца или плазмы-калибратора с активностью ATIII от 0,1 до 1,0 МЕ/мл. Анализ проводят при температуре 37°С согласно схеме, приведенной в инструкции к набору. Для каждого разведения трижды определяют величину оптической плотности при 405 нм и в линейных координатах строят калибровочный график зависимости абсорбции от активности ATIII.

Готовят 2 разведения исследуемого образца с ориентировочной активностью ATIII менее 1,0 МЕ/мл. Определение активности ATIII в испытуемых образцах проводят при температуре 37°С согласно указаниям в инструкции к набору. Активность ATIII в испытуемых разведениях находят по калибровочному графику. Активность ATIII в исследуемом образце определяют как:

A x – активность ATIII в соответствующем разведении;

k – разведение образца.

Количественное определение гепарина

1. Клоттинговый метод

Метод основан на способности гепарина за счет ингибирования ряда факторов удлинять время свертывания нормальной плазмы.

Для проведения анализа используют нормальную человеческую плазму, стандартный образец гепарина, АЧТВ-реагент и раствор хлористого кальция 0,025М. В качестве разбавителя стандартного и испытуемых образцов используют 0,9% раствор натрия хлорида. Стандартный образец гепарина растворяют в дистиллированной воде согласно указаниям в инструкции. Готовят 3 разведения стандартного образца с активностью гепарина 0,3, 0,4 и 0,5 МЕ/мл. Образцы стандарта с данными активностями должны удлинять время свертывания нормальной плазмы минимум в 1,5 раза, в противном случае следует использовать разведения с большей активностью гепарина. Параллельно готовят 3 разведения исследуемого образца таким образом, чтобы ориентировочно активность гепарина в данных разведениях попадала в интервал активности гепарина в разведениях стандартного образца.

Анализ проводят с помощью автоматического или полуавтоматического коагулометра в пластиковых пробирках при температуре 37°С. В пробирку вносят 100 мкл нормальной человеческой плазмы, 100 мкл разведения стандартного или исследуемого образца или 100 мкл 0,9% раствора натрия хлорида (холостой опыт), добавляют по 100 мкл АЧТВ-реагента и инкубируют смесь в течение 120 – 240 с при температуре (37±0,1)°С. Затем в пробирку вносят 100 мкл предварительно прогретого до температуры 37°С 0,025М раствора кальция хлорида и фиксируют время свертывания образца. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут быть изменены с соблюдением пропорции. Время свертывания нормальной плазмы (холостой опыт) должно составлять 25 – 40 с. Для каждого разведения стандартного и исследуемого образцов время свертывания определяют трижды.

1. Хромогенный метод

Метод основан на расщеплении хромогенного субстрата, специфического для активированного фактора Х (FXa). При внесении в образец, содержащий гепарин, избыточных количеств ATIII и FXa происходит ингибирование количества FXа, пропорционального количеству гепарина. Оставшийся FXa отщепляет от специфического хромогенного субстрата п -нитроанилин, абсорбцию которого определяют при 405 нм. Таким образом, величина абсорбции обратно пропорциональна количеству гепарина. Данным методом определяют содержание как нефракционированного, так и низкомолекулярного гепарина в анти-Xa единицах.

Количество гепарина хромогенным методом определяют с помощью коммерческих тестовых систем. Для построения калибровочного графика используют стандартный образец гепарина или плазму-калибратор, аттестованную по международному стандарту. Стандартный образец или плазму-калибратор разводят в дистиллированной воде согласно инструкции. Готовят 4 разведения стандартного образца с концентрацией гепарина менее 1 анти-Xa ед/мл, используя буфер для разведения pH 8,4. Анализ проводят при температуре 37°С в соответствии с инструкцией к набору. Для каждого разведения трижды определяют абсорбцию при 405 нм, после чего в линейных координатах строят калибровочный график зависимости величины поглощения от концентрации гепарина. Зависимость линейна в диапазоне концентраций гепарина 0 – 1,0 анти-Xa ед/мл.

Для исследуемого образца готовят 2 разведения с концентрацией гепарина менее 1 анти-Xa ед/мл. Анализ проводят согласно инструкции к набору при температуре 37°С. Для каждого разведения величину абсорбции определяют трижды.

Определение проводят в ручном режиме с использованием пластиковых пробирок, микропланшет или в автоматическом режиме с использованием коагулометра.

Для проведения испытаний в ручном режиме в лунки микропланшета вносят по 20 мкл стандартной плазмы человека и 20 мкл раствора антитромбина III. Далее в эти лунки вносят соответственно по 20 , 60 , 100 и 140 мкл испытуемого или стандартного препарата и доводят объем раствора в каждой лунке до 200 мкл буфером (активность гепарина в конечной реакционной смеси 0,02 — 0,08 ME/мл).

По 40 мкл из каждой лунки планшета переносят во вторую серию лунок, в которые добавляют по 20 мкл раствора бычьего фактора Ха и инкубируют при температуре (37±0,5)°C в течение 30 с, после чего в лунки добавляют по 40 мкл раствора хромогенного субстрата фактора Ха и вновь инкубируют при температуре (37 ± 0,5)°C в течение 3 – 15 мин, измеряя скорость расщепления субстрата путем постоянного измерения оптической плотности при длине волны 405 нм (кинетический режим) или после остановки реакции добавлением 20% (об/об) раствора уксусной кислоты ледяной (конечная точка определения).

При проведении исследований в автоматическом режиме с использованием коагулометра получают значения зависимости изменения оптической плотности от концентрации гепарина.

Формула, химическое название: нет данных.
Фармакологическая группа: гематотропные средства/ Коагулянты (в том числе факторы свертывания крови), гемостатики.
Фармакологическое действие: гемостатическое, восполняющее дефицит фактора свертывания VIII.

Фармакологические свойства

Фактор свертывания крови VIII является гемостатическим лекарственным средством, которое используется при гемофилии A. Фактор свертывания крови VIII ускоряет переход протромбина в тромбин и, таким образом, способствует формированию фибринового сгустка. При введении больным с гемофилией фактор свертывания крови VIII связывается с фактором Виллебранда в сосудах. Активированный фактор свертывания крови VIII воздействует как кофактор для активированного фактора IX, ускоряя преобразование фактора X в активированный фактор X. Активированный фактор X, в свою очередь, преобразует протромбин в тромбин. Далее тромбин превращает фибриноген в фибрин, и при этом уже может образоваться сгусток. Гемофилия A - это наследственное, связанное с полом нарушение свертывания крови, которое вызывается уменьшением уровня фактора свертывания крови VIII, приводит к профузным кровотечениям в мышцы, суставы, внутренние органы и может быть как спонтанным, так и в результате хирургических вмешательств или случайных травм. При проведении заместительного лечения уровень фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови возрастает, что позволяет временно восполнить недостаточность фактора свертывания крови VIII и снизить склонность к кровотечениям. Удельная активность фактора свертывания крови VIII составляет не менее 100 МЕ/мг общего белка.
Фактор свертывания крови VIII является обычным компонентом сыворотки крови человека и оказывает такое же действие, как и эндогенный фактор свертывания крови VIII. После введения фактора свертывания крови VIII приблизительно от 2/3 до 3/4 лекарственного препарата остается в кровотоке. Уровень активности фактора свертывания крови VIII, который достигается в сыворотке крови, должен составлять 80 - 120 % от ожидаемой активности фактора свертывания крови VIII. Активность фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови уменьшается соответственно модели двухфазного экспоненциального убывания. В первой фазе происходит распределение фактора свертывания крови VIII между внутрисосудистыми и прочими жидкостями организма с периодом полувыведения 3 - 6 часов. Во второй, более медленной фазе, которая, скорее всего, отражает потребление фактора свертывания крови VIII, период полувыведения составляет в среднем 12 часов (от 8 до 20 часов). Что соответствует истинному биологическому периоду полувыведения фактора свертывания крови VIII. У пациентов с гемофилией A средние значения фармакокинетических показателей фактора свертывания крови VIII составляют: восстановление - 2,4 % × МЕ^-1 × кг; площадь под фармакокинетической кривой концентрация - время кривой - от 33,4 до 45,5 % × ч × МЕ^-1 × кг; среднее время нахождения в крови - от 16,6 до 19,6 часов; период полувыведения - от 12,6 до 14,3 часов; клиренс - от 2,6 до 3,2 мл × ч^-1 × кг.

Показания

Терапия и профилактика кровотечений у пациентов с врожденной гемофилией A или приобретенной недостаточностью фактора свертывания крови VIII, включая ингибиторные формы (с применением метода индукции иммунной толерантности).

Способ применения фактора свертывания крови VIII и дозы

Фактор свертывания крови VIII вводится внутривенно, после разведения в воде для инъекций. Доза и продолжительность заместительного лечения зависит от степени тяжести недостаточности фактора свертывания крови VIII, локализации и продолжительности кровотечения, объективного состояния пациента. Лечение необходимо начинать под контролем врача, который имеет опыт терапии пациентов с гемофилией.
Количество единиц фактора свертывания крови VIII выражается в международных единицах (МЕ), которые установлены текущими стандартами Всемирной Организации Здравоохранения для фактора свертывания крови VIII. Активность фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови выражается в процентах (относительно нормального уровня фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови человека) или в МЕ (относительно международного стандарта для фактора свертывания крови VIII). 1 МЕ активности фактора свертывания крови VIII эквивалентна содержанию фактора свертывания крови VIII в 1 мл нормальной сыворотки крови человека. Расчет нужной дозы лекарственного препарата основан на эмпирических данных, по которым 1 МЕ фактора свертывания крови VIII на один кг массы тела увеличивает активность фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови на 1,5 - 2 % от нормальной активности. Для расчета нужной дозы лекарственного препарата определяют начальный уровень активности фактора свертывания крови VIII и насколько эту активность нужно увеличить. Необходимую дозу лекарственного препарата вычисляют по следующей формуле: необходимая доза = масса тела (кг) × желаемое увеличение уровня фактора свертывания крови VIII (%) (МЕ/дл) × 0,5. Частота использования и дозы лекарственного средства всегда должны быть направлены на достижение клинического эффекта в каждом конкретном случае. При кровотечениях после начала лечения активность фактора свертывания крови VIII не должна снижаться меньше начального уровня в сыворотке крови (% от нормальной концентрации) в соответствующий период времени.
При ранних гемартрозах, внутримышечных кровотечениях, кровотечениях ротовой полости необходимый уровень фактора свертывания крови VIII составляет 20 - 40 %, необходимы повторные введения лекарственного препарата каждые 12 - 24 часа не менее одних суток до утихания боли или заживления источника кровотечения. При более интенсивных кровотечениях, внутримышечных кровотечениях или гематомах необходимый уровень фактора свертывания крови VIII составляет 30 - 60 %, необходимы повторные введения лекарственного препарата каждые 12 - 24 часа в течение 3 - 4 дней до утихания боли и восстановления трудоспособности. При угрожающих жизни кровотечениях необходимый уровень фактора свертывания крови VIII составляет 60 - 100 %, необходимы повторные введения лекарственного препарата каждые 8 - 24 часа до полного исчезновения угрозы. При малых хирургических вмешательствах, включая удаление зубов, необходимый уровень фактора свертывания крови VIII составляет 30 - 60 %, необходимо введение лекарственного препарата каждые 24 часа не менее одних суток до достижения заживления. При крупных хирургических вмешательствах необходимый уровень фактора свертывания крови VIII составляет 80 - 100 % (дооперационный и постоперационный), необходимы повторные введения лекарственного препарата каждые 8 - 24 часа до адекватного заживления раны, далее не менее одной недели для поддержания активности фактора свертывания крови VIII на уровне 30 - 60 %. Необходимую частоту использования и дозу лекарственного препарата устанавливает лечащий врач.
При проведении лечения следует оценивать уровень фактора свертывания крови VIII для коррекции дозы и частоты повторных инъекций лекарственного препарата. Необходимо тщательно контролировать активность фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови, в особенности при крупных хирургических вмешательствах. Ответ на лечение у отдельных больных может отличаться, на что указывают различия в периоде полувыведения и степени восстановления активности фактора свертывания крови VIII.
Для продолжительной профилактики кровотечений у больных с тяжелой формой гемофилии A средняя доза фактора свертывания крови VIII составляет 20 - 40 МЕ/кг массы тела с интервалами в 2 - 3 дня. У некоторых больных, в особенности у пациентов молодого возраста, может возникнуть необходимость в сокращении интервала между введениями фактора свертывания крови VIII или же увеличение его дозы.
У некоторых больных после терапии лекарственным препаратом возможно формирование ингибиторов фактора свертывания крови VIII, что может оказать влияние на эффективность дальнейшей терапии. Если на фоне проводимой терапии не отмечается ожидаемого увеличения активности фактора свертывания крови VIII или нет требуемого гемостатического эффекта, то рекомендуется консультация в специализированном лечебном центре с применением теста Бетесда. Для элиминации ингибитора фактора свертывания крови VIII может быть применена индукция иммунной толерантности, которая заключается в ежедневном введении фактора свертывания крови VIII в концентрации, которая превышает блокирующую способность ингибитора (100 - 200 МЕ/кг/сутки в зависимости от титра ингибитора). Фактор свертывания крови VIII выполняет функцию антигена и провоцирует рост титра ингибитора фактора свертывания крови VIII до развития толерантности, то есть снижения и дальнейшего исчезновения ингибитора. Индукция иммунной толерантности проводится постоянно и продолжается в среднем от 10 до 18 месяцев. Индукция иммунной толерантности должна проводиться только врачами, которые являются специалистами в области антигемофильного лечения.
Клинические данные об использовании фактора свертывания крови VIII у ранее не леченых больных ограничены.
Клиническое исследование при участии 15 пациентов до 6 лет не выявило специальных требований для дозирования лекарственного препарата у детей.
Необходимо контролировать наличие ингибиторов фактора свертывания крови VIII у больных. Если на фоне проводимой терапии не отмечается ожидаемого увеличения активности фактора свертывания крови VIII или нет необходимого гемостатического эффекта, то необходимо провести анализ на наличие ингибиторов фактора свертывания крови VIII. Если у больных с высоким уровнем ингибиторов фактора свертывания крови VIII лечение лекарственным препаратом неэффективно, то необходимо рассмотреть вопрос об альтернативной терапии. Лечением данных больных должны заниматься врачи, которые имеют опыт терапии гемофилии.
Имеются промежуточные данные продолжающегося исследования при участии пациентов, которые проходят индукцию иммунной толерантности фактором свертывания крови VIII. Режим дозирования устанавливается в лечебном учреждении индивидуально для каждого больного. Больные со слабым ответом, как правило, получают фактор свертывания крови VIII в дозе 50 - 100 МЕ/кг массы тела каждый день или через день, больные с сильным ответом, как правило, получают фактор свертывания крови VIII в дозе 100 - 150 МЕ/кг массы тела каждые 12 часов. Титры ингибиторов фактора свертывания крови VIII определяют два раза в 7 дней в первые три месяца, затем титры ингибиторов фактора свертывания крови VIII определяют каждые три месяца во время плановых посещений лечебных учреждений для продолжения лечения. Результат индукции иммунной толерантности определяется через три года по трем последовательным критериям, в том числе негативный титр ингибиторов фактора свертывания крови VIII, восстановление активности фактора свертывания крови VIII, нормализация периода полувыведения фактора свертывания крови VIII. При промежуточном анализе установлено, что из 69 больных, которые получали фактор свертывания крови VIII в качестве индукции иммунной толерантности, 49 пациентов завершили исследование. У больных с успешной элиминацией ингибитора фактора свертывания крови VIII ежемесячная частота кровотечений значимо уменьшилась.
Перед внутривенным введением восстановленный лекарственный препарат необходимо осмотреть на изменение окраски и наличие механических включений. Восстановленный раствор фактора свертывания крови VIII должен быть прозрачным или слегка опалесцирующим. Нельзя использовать мутный раствор фактора свертывания крови VIII или при наличии сгустков в нем. Восстановленный раствор фактора свертывания крови VIII необходимо применять сразу же после приготовления и только один раз.
В качестве меры предосторожности следует контролировать частоту сердечных сокращений перед и во время введения фактора свертывания крови VIII. При выраженном учащении пульса введение фактора свертывания крови VIII необходимо замедлить или прекратить.
Любой неиспользованный раствор фактора свертывания крови VIII должен быть утилизирован согласно существующим правилам.
Как и при использовании любого лекарственного средства белкового происхождения, для внутривенного введения возможно развитие реакций повышенной чувствительности аллергического типа. Кроме фактора свертывания крови VIII лекарственный препарат содержит следовые количества других белков плазмы крови человека. Необходимо проинформировать больных о ранних признаках реакций повышенной чувствительности, включая генерализованную и местную крапивницу, свистящее дыхание, ощущение сдавления грудной клетки, гипотензию, анафилаксию. При развитии данных симптомов необходимо немедленно прекратить использование лекарственного препарата и обратиться к лечащему врачу. При развитии шока необходимо провести стандартное противошоковое лечение.
При применении фактора свертывания крови VIII в редких случаях отмечались реакции повышенной чувствительности или аллергические реакции, которые могут включать ощущение жжения в месте введения, ощущение покалывания в месте введения, ангионевротический отек, приливы крови к лицу, озноб, генерализованную крапивницу, местную крапивницу, головную боль, гипотензию, апатичность, тошноту, тахикардию, беспокойство, ощущение сдавления грудной клетки, рвоту, звон в ушах, свистящее дыхание, в некоторых случаях данные симптомы могут прогрессировать, в том числе, до развития тяжелой анафилаксии, включая шок.
У пациентов с гемофилией A при применении фактора свертывания крови VIII возможно появление ингибиторов (антител) фактора свертывания крови VIII, что проявляется недостаточным клиническим ответом на введение лекарственного препарата. В данной ситуации необходимо обратиться в специализированный гематологический центр. Образование нейтрализующих ингибиторов (антител) фактора свертывания крови VIII является известным осложнением лечения пациентов с гемофилией A. Обычно этими ингибиторами фактора свертывания крови VIII являются иммуноглобулины G, действие которых направлено против прокоагулянтной активности фактора свертывания крови VIII, их уровень определяют в единицах Бетесда на мл сыворотки крови с применением модифицированного метода. Риск формирования ингибиторов фактора свертывания крови VIII коррелирует с использованием лекарственного препарата и наиболее высок в первые 20 дней лечения. В редких случаях ингибиторы фактора свертывания крови VIII могут выявиться после первых 100 дней использования лекарственного препарата. Необходим тщательный контроль всех пациентов, которые получают лечение лекарственными препаратами фактора свертывания крови VIII, на предмет появления антител к фактору свертывания крови VIII путем проведения соответствующих лабораторных анализов и клинических наблюдений. В продолжающемся клиническом исследовании при участии ранее не леченых больных у 3 из 39 человек, которые получали фактор свертывания крови VIII по необходимости, появились ингибиторы фактора свертывания крови VIII. Два случая были клинически значимыми, у двух других пациентов ингибиторы фактора свертывания крови VIII спонтанно исчезли без изменения дозы лекарственного препарата. Все случаи образования ингибиторов фактора свертывания крови VIII отмечались при терапии по необходимости на протяжении не более 50 дней. Отмечался начальный уровень активности фактора свертывания крови VIII менее 1 % у 35 ранее не леченых больных и менее 2% у 4 ранее не леченых больных. К моменту промежуточного анализа фактор свертывания крови VIII использовали на протяжении не менее 20 дней у 34 больных и на протяжении не менее 50 дней у 30 больных. У ранее не леченых больных, которые применяли фактор свертывания крови VIII для профилактики, ингибиторы фактора свертывания крови VIII не определялись. Во время исследования 12 ранее не леченых больных подверглись 14 оперативным вмешательствам. Средний возраст больного на момент первого использования фактора свертывания крови VIII составил 7 месяцев (от 3 дней до 67 месяцев), а средняя длительность использования фактора свертывания крови VIII в клиническом исследовании составила 100 дней (от 1 до 553 дней).
Есть информация о наличии связи между образованием ингибиторов фактора свертывания крови VIII и аллергическими реакциями, поэтому при развитии аллергических реакций больной должен быть обследован на наличие ингибиторов фактора свертывания крови VIII. У пациентов с ингибиторами фактора свертывания крови VIII может быть повышен риск анафилаксии при последующем применении фактора свертывания крови VIII. Поэтому первое введение фактора свертывания крови VIII необходимо проводить по назначению лечащего врача под медицинским контролем в условиях, которые позволяют оказывать необходимую медицинскую помощь при развитии аллергических реакций.
Стандартные меры профилактики инфекционных заболеваний, которые могут быть вызваны использованием лекарственных средств, приготовленных из крови или сыворотки крови человека, включают отбор доноров, скрининг индивидуальных донаций и пулов сыворотки крови на специфические маркеры инфекционных заболеваний внедрение в производство лекарственных препаратов эффективных стадий инактивации и удаления микроорганизмов. Но при использовании лекарственных средств, которые приготовлены из крови или сыворотки крови человека, риск передачи микроорганизмов, которые вызывают инфекционные заболевания, не может быть полностью исключен. Также это относится к новым или неизвестным микроорганизмам. Данные меры профилактики инфекционных заболеваний считаются эффективными в отношении оболочечных вирусов (вирус иммунодефицита человека, вирус гепатита B, вирус гепатита C) и безоболочечного вируса гепатита A. Эти меры профилактики инфекционных заболеваний могут иметь ограниченную эффективность в отношении безоболочечных вирусов, например, парвовирус B19. Инфекционное заболевание, которое вызвано парвовирусом B19, может иметь серьезные последствия для женщин во время беременности (инфицирование плода) и пациентов с иммунодефицитом или усиленным эритропоэзом (например, при гемолитической анемии). У больных, которые регулярно и многократно получают лекарственные препараты фактора свертывания крови VIII, произведенные из сыворотки крови человека, необходимо рассмотреть вопрос о проведении соответствующей вакцинации против гепатитов A и B.
Для установления связи между больным и серией лекарственного средства рекомендуется каждый раз при использовании фактора свертывания крови VIII записывать название и номер серии лекарственного препарата.

При применении фактора свертывания крови VIII необходимо соблюдать осторожность при выполнении потенциально опасных видов деятельности, которые требуют повышенной концентрации внимания и быстроты психомоторных реакций (включая управление транспортными средствами, механизмами), так как возможно развитие головной боли, звона в ушах, гипотензии и других побочных реакций, которые могут оказать негативное влияние на выполнение указанных видов деятельности. При развитии таких побочных реакций необходимо отказаться от выполнения потенциально опасных видов деятельности, которые требуют повышенной концентрации внимания и быстроты психомоторных реакций (включая управление транспортными средствами, механизмами).

Противопоказания к применению

Гиперчувствительность (в том числе к вспомогательным компонентам лекарственного препарата).

Ограничения к применению

Беременность, кормление грудью.

Применение при беременности и кормлении грудью

Так как гемофилия A встречается у женщин редко, то опыт использования фактора свертывания крови VIII у женщин во время беременности и в период грудного вскармливания отсутствует. Фактор свертывания крови VIII у женщин во время беременности и в период грудного вскармливания следует применять только при наличии абсолютных показаний, когда ожидаемая польза для матери выше возможного риска для плода или ребенка.

Побочные действия фактора свертывания крови VIII

Нервная система, психика и органы чувств: головная боль, беспокойство, звон в ушах.
Сердечно-сосудистая система, кровь (гемостаз, кроветворение) и лимфатическая система: гипотензия, приливы крови к лицу, тахикардия.
Пищеварительная система: тошнота, рвота.
Дыхательная система: ощущение сдавления грудной клетки, свистящее дыхание.
Иммунная система: реакции гиперчувствительности, анафилактический шок, аллергические реакции, тяжелая анафилаксия, ангионевротический отек, генерализованная крапивница, местная крапивница.
Общие расстройства и реакции в месте введения: ощущение жжения в месте введения, ощущение покалывания в месте введения, озноб, апатия, повышение температуры тела.
Лабораторные показатели: образование антител к фактору свертывания крови VIII в сыворотке крови.

Взаимодействие фактора свертывания крови VIII с другими веществами

Нет данных о взаимодействии фактора свертывания крови VIII с другими лекарственными препаратами.
Не следует использовать другие лекарственные средства при введении фактора свертывания крови VIII.

Передозировка

Случаев передозировки фактором свертывания крови VIII зарегистрировано не было. Рекомендуется не превышать назначенную дозу фактора свертывания крови VIII.

Торговые названия препаратов с действующим веществом фактор свертывания крови VIII

Агемфил А
Антигемофильный фактор человека-М (AHF-M)
Бериате
Гемоктин
Гемофил М
Иммунат
Коэйт-ДВИ
Коэйт-ХП
Криобулин ТИМ 3
Криопреципитат
ЛонгЭйт
Октави
Октанат
Фанди
Хематэ П
Эмоклот Д.И.

Комбинированные препараты:
Фактор свертывания крови VIII + Фактор Виллебранда: Вилате, Гемате® П.

Фактор VIII - антигемофильный глобулин А, или плазменный тромбопластический фактор А,- относится к сложным гликопротеидам. Доказан синтез фактора VIII в печени, селезенке, клетках эндотелия, лейкоцитах, почках. Антигемофильный глобулин А быстро инактивируется при 200 и 370С. Он стабилен несколько часов при +40С и несколько недель при -200С. Быстро исчезает из консервированной крови. Фактор VIII дольше активен в присутствии цитрата натрия при pH 6,2-6,9, но быстро теряет активность в среде ЭДТА. Он не адсорбируется на сульфате бария и гидроокиси алюминия. Этим пользуются для отделения фактора VIII от факторов II, VII, IX и Х. В крови этот фактор циркулирует в виде комплекса из трех субъединиц, обозначаемых VIIIk (коагулирующая единица), VIII-АГ (основной антигенный маркер) и VIII-фВ (фактор Виллебранда, связанный с VIII-АГ). VIII-фВ регулирует синтез коагулянтной части антигемофильного глобулина - VIIIk.

При свертывании крови фактор VIII остается в неактивном состоянии.

Почему важно делать фактора свертывания VIII?

Одним из наиболее распространенных тяжелых наследственных заболеваний является гемофилия, частота которой в нашей стране составляет 1 на 8-10 тыс. мужского населения. Заболевание характеризуется спонтанными, нередко смертельными кровотечениями, кровоизлияниями в суставы, ведущими к ранней инвалидности. Эти больные в течение всей жизни нуждаются в заместительной терапии препаратами плазмы. Основным в патогенезе гемофилии является нарушение 1 фазы свертывания крови, связанное с дефицитом ф.VIII (гемофилия А), ф.IX (гемофилия В), ф.XI (гемофилия С). Уже при снижении дефицитного фактора до 30% (норма 50-150%) заболевание проявляется в скрытой форме и обнаруживается после оперативных вмешательств в виде профузных кровотечений. Очевидно, что для достоверной диагностики гемофилии и при лечении больных чрезвычайно большое значение приобретает метод определения активности дефицитного фактора в плазме крови пациентом.

Гемофилия тяжелой степени. Уровень ф.VIII или IX менее 1%. Кровоизлияния в суставы, мышцы и другие органы случаются при минимальных или даже незаметных повреждениях.

Гемофилия средней степени. Уровень ф.VIII или IX между 1-5%. Кровотечения возникают из-за явных незначительных повреждений, также после различных операций и удалений зубов.

Гемофилия легкой степени. Уровень ф.VIII или IX между 6-30%. Кровоизлияния обычно следуют только за крупными повреждениями, хирургическими операциями или удалением зубов. Диагностика такой формы может быть не сделана до взрослого возраста или до проявления кровотечений после указанных ситуаций.

Хроматографически очищенная лиофилизированная фракция плазмы крови человека, содержащая фактор VIII свертывания крови. Антигемофильный глобулин, восполняет дефицит фактора свертывания VIII, временно компенсирует коагуляционный дефект у больных гемофилией А. Находится в естественном сочетании с белком С фактора VIII, фактором Виллебранда. Включается в процессы свертывания крови, способствует переходу протромбина в тромбин и образованию фибринового сгустка. Сразу после введения повышает коагуляционный потенциал крови. Снижение активности антигемофильного фактора носит двухфазный характер: ранняя фаза — быстрое снижение активности, характеризует время уравновешивания с внесосудистым пространством, вторая фаза — медленная, отражает биологический период полураспада введенного антигемофильного фактора и составляет 9-14 ч. Специфическая активность (после добавления альбумина человека) — 9-22 МЕ протеина. 1 МЕ (по определению стандарта фактора VIII свертывающей системы крови ВОЗ) приблизительно равна уровню антигемофильного фактора, присутствующего в 1 мл свежей донорской плазмы человека.
Время достижения максимальной концентрации в плазме крови после в/в введения — от 10 мин до 2 ч. Период полувыведения — 8,4-19,3 ч. Активность фактора свертывания VIII снижается постепенно — на 15% в течение 12 ч. При гипертермии период полувыведения фактора свертывания VIII может уменьшаться.

Показания к применению препарата Фактор свертывания VIII

Гемофилия А, болезнь Виллебранда (лечение и профилактика кровотечений, в том числе во время хирургических вмешательств); приобретенный дефицит фактора VIII, заболевания, сопровождающиеся образованием антител к фактору VIII.

Применение препарата Фактор свертывания VIII

В/в. Для профилактики спонтанного кровотечения или при легком кровотечении — 10 МЕ/кг (содержание фактора VIII, необходимого для предупреждения спонтанного кровотечения — 5% нормального уровня); при умеренном кровотечении и проведении небольшого по объему хирургического вмешательства (например экстракция зуба) — 15-25 МЕ/кг (содержание фактора VIII — 30-80% нормы) с последующей поддерживающей дозой 10-15 МЕ/кг каждые 12-24 ч в течение 3 сут или до получения достаточного клинического эффекта; при остром кровотечении, угрожающем жизни — 40-50 МЕ/кг (содержание фактора VIII — 60-100% нормы) с последующей поддерживающей дозой 20-25 МЕ/кг каждые 8-24 ч; при обширных хирургических вмешательствах — 40-50 МЕ/кг за 1 ч до процедуры и 20-25 МЕ/кг — через 5 ч после первой дозы (то есть 80-100% нормы до и после операции), затем повторяют каждые 8-24 ч до получения достаточного клинического эффекта. Для длительной профилактики кровотечений при тяжелой гемофилии А — 12-25 МЕ/ кг каждые 2-3 дня.
Криопреципитат применяют с учетом совместимости по АВ0-группам крови. Емкость с замороженным криопреципитатом помещают для оттаивания и полного растворения на водяную баню при температуре не выше 35-37 °С и выдерживают не более 7 мин. Образующийся при этом прозрачный желтоватого цвета р-р, который не должен содержать хлопьев, применяют сразу после приготовления. Вводят в/в струйно с помощью шприца или системы для переливания с фильтром одноразового пользования. Доза зависит от исходного содержания фактора VIII в крови больного гемофилией, характера и локализации кровотечений, степени риска хирургического вмешательства, наличия в крови больного специфического ингибитора, способного нейтрализовать активность фактора VIII (выражается в единицах активности фактора VIII). Для обеспечения эффективного гемостаза при наиболее частых осложнениях гемофилии (гемартрозы, почечные, десневые и носовые кровотечения), а также удалении зубов содержание фактора VIII в плазме должно быть не ниже 20%; при межмышечных гематомах, желудочно-кишечных кровотечениях, переломах и других травмах — не ниже 40%; при большинстве хирургических вмешательств — не менее 70%. При введении фактора VIII из расчета 1 ЕД на 1 кг массы тела его содержание в крови увеличивается в среднем на 1%. Исходя из этого, количество доз, необходимое для повышения концентрации фактора VIII в крови до заданного уровня вычисляют по формуле: массу тела больного (в кг) умножить на необходимое содержание фактора VIII в крови больного и разделить на 200 (минимальное содержание фактора VIII в единицах активности в 1 дозе криопреципитата). После полной остановки кровотечения введение фактора VIII больным гемофилией осуществляют с интервалом 12-24 ч в дозе, обеспечивающей повышение содержания фактора VIII не менее чем на 20%. Лечение продолжают в течение нескольких дней — до видимого уменьшения размеров гематомы. При хирургических вмешательствах гемостатическую дозу вводят за 30 мин до операции. При массивном кровотечении восполняют кровопотерю, в конце операции криопреципитат вводят повторно (1/2 дозы от первоначальной). Через 3-5 дней после операции необходимо поддерживать концентрацию фактора VIII в крови больного в тех же пределах, что и во время операции. В послеоперационный период в дальнейшем для поддержания гемостаза достаточно повысить содержание фактора VIII до 20%. Длительность гемостатической терапии — 7-14 дней и зависит от характера, локализации кровотечения, репаративных особенностей ткани. Лечение больного гемофилией криопреципитатом целесообразно сочетать с одновременным назначением антифибринолитических средств и ГКС в профилактических и средних терапевтических дозах.

Противопоказания к применению препарата Фактор свертывания VIII

Повышенная чувствительность.

Побочные эффекты препарата Фактор свертывания VIII

Аллергические и трансфузионные реакции (крапивница, сыпь, стридорозное дыхание, снижение АД, озноб, гипертермия, анафилаксия), преходящая парестезия слизистой оболочки полости рта, тошнота, рвота, головная боль .

Особые указания по применению препарата Фактор свертывания VIII

С осторожностью применяют в период беременности и кормления грудью.
Необходимо осуществлять контроль ЧСС до и во время терапии: при значительном повышении ЧСС замедляют скорость инфузии или прекращают введение. Во время и после окончания курса терапии необходимо контролировать содержание фактора VIII в крови. Для выявления признаков прогрессирующей гемолитической анемии необходимо осуществлять контроль за гематокритом и прямой реакцией Кумбса. Изменения иммунного статуса у больных асимптоматической гемофилией обусловлены многократным воздействием вирусных возбудителей и/или возможным наличием примесей в препаратах фактора VIII (например IgG). Для достижения удовлетворительных клинических результатов помимо первоначально рассчитанной дозы возможно введение дополнительной дозы. При отсутствии клинического эффекта необходимо провести тест на выявление ингибитора и определить его количество в нейтрализованных антигемофильных единицах на 1 мл или общий объем плазмы. Для снижения риска развития побочных эффектов рекомендуется использовать не позднее 1 ч после разведения, вводить только в/в, в течение не менее 3 ч (со скоростью 10 мл/мин), р-р не замораживать и не использовать вторично. Возможно развитие антител к фактору свертывания VIII, в таких случаях эффективность терапии обычно снижается, что может потребовать повышения дозы фактора свертывания VIII. Возможно повышение скорости снижения показателей CD4-клеточного анализа у ВИЧ-сероположительных больных гемофилией.

Фактор свертывания крови VIII (Coagulation Factor VIII)

Клинико-фармакологическая группа

Препарат фактора VIII свертывания крови

Фармакологическое действие

Гемостатический препарат. Способствует переходу протромбина в тромбин и образованию фибринового сгустка.

Фармакокинетика

У пациентов с гемофилией А T 1/2 составляет 12 ч. Активность фактора свертывания крови VIII снижается на 15% в течение 12 ч. Фактор свертывания крови VIII термолабилен и при повышении температуры быстро разрушается, что приводит к уменьшению T 1/2 .

Дозировка

Октанат вводят в/в после разведения водой для инъекций, находящейся в комплекте в упаковке. Доза Октаната и длительность заместительной терапии зависят от степени дефицита фактора свертывания крови VIII, локализации и длительности кровотечения, клинического состояния пациента.

Доза препарата выражается в Международных Единицах (ME) в соответствии с принятыми стандартами ВОЗ для фактора свертывания крови VIII. Активность фактора свертывания крови VIII в плазме выражается или в процентном соотношении (относительно нормального содержания фактора в человеческой плазме), или в МЕ (относительно Международного Стандарта для фактора свертывания крови VIII).

1 МЕ фактора свертывания крови VIII эквивалентна его содержанию в 1 мл нормальной человеческой плазмы. Расчет требуемой дозы основан на эмпирически полученных результатах, согласно которым 1 МЕ/кг фактора свертывания крови VIII повышает уровень плазменного фактора на 1.5-2% от нормального содержания. Для расчета необходимой для пациента дозы определяют исходный уровень активности фактора свертывания крови VIII и оценивают, на сколько эту активность нужно повысить.

Необходимая доза = масса тела (кг) × желаемое повышение уровня фактора свертывания крови VIII (%) (МЕ/дл) × 0.5.

Количество и частота применения препарата всегда должны соответствовать клинической эффективности в каждом индивидуальном случае.

В случае последующих кровотечений уровень активности фактора свертывания крови VIII не должен уменьшаться ниже исходного уровня в плазме (% от нормального содержания) в соответствующий период времени. Следующая таблица может быть использована в качестве ориентира для выбора дозы фактора свертывания крови VIII при различных кровотечениях и хирургических вмешательствах.

Тяжесть кровотечения/тип хирургического вмешательства	Необходимый уровень фактора свертывания крови VIII (%)	Частота введения и длительность терапии
Кровотечение
Ранние гемартрозы, внутримышечные кровотечения, кровотечения в ротовой полости	20-40	Повторять каждые 12-24 ч, по крайней мере, 1 сутки, до купирования боли или заживления источника кровотечения
Более обширные гемартрозы, внутримышечные кровотечения или гематомы	30-60	Повторные введения каждые 12-24 ч в течение 3-4 дней, до купирования боли и восстановления трудоспособности
Угрожающие жизни кровотечения	60-100	Повторные введения каждые 8-24 ч, до полного исчезновения угрозы жизни
Хирургические вмешательства
Малые, включая удаление зубов	30-60	Каждые 24 ч, по крайней мере, 1 сутки, до достижения заживления
Крупные	80-100 (до- и послеоперационный)	Повторные введения каждые 8-24 ч, до адекватного заживления раны, затем, как минимум, 7 дней для поддержки активности фактора свертывания крови VIII на уровне 30-60%

Пациенты реагируют на введение препарата индивидуально, при этом наблюдается различный уровень восстановления in vivo, T 1/2 фактора свертывания крови VIII характеризуется вариабельностью. Поэтому в процессе лечения для регулирования применяемой дозы и частоты введений следует контролировать его уровень. Активность фактора свертывания крови VIII следует контролировать при заместительной терапии, особенно во время крупных оперативных вмешательств.

Дозы, указанные в таблице, являются ориентировочными. Необходимую дозу и частоту применения препарата врач устанавливает индивидуально.

С целью длительной профилактики кровотечений при тяжелой форме гемофилии А препарат назначают в дозе 20-40 МЕ/кг массы тела каждые 2-3 дня. В некоторых случаях, особенно у молодых пациентов, может возникнуть необходимость сокращения интервала между введениями или повышения дозы.

У некоторых пациентов после лечения возможно образование ингибиторных антител к фактору свертывания крови VIII, что может повлиять на эффективность дальнейшего лечения. Если на фоне проводимой терапии не отмечается ожидаемого повышения активности фактора VIII или отсутствует требуемый гемостатический эффект, рекомендуется консультация в специализированном лечебном центре с использованием теста Бетезда. Для элиминации ингибитора к фактору свертывания крови VIII может быть использована терапия индукции иммунной толерантности. Ее основой является ежедневное введение фактора свертывания крови VIII в концентрации, превышающей блокирующую способность ингибитора (100-200 МЕ/кг/сут в зависимости от титра ингибитора). Фактор свертывания крови VIII, выполняя функцию антигена, провоцирует рост титра ингибитора до развития толерантности, т.е. до уменьшения и последующего исчезновения ингибитора. Терапия является непрерывной и продолжается в среднем от 10 до 18 мес. Такое лечение должно проводиться только специалистами в области антигемофильной терапии.

Растворение лиофилизата

1. Растворитель (вода для инъекций) и лиофилизат в закрытых флаконах рекомендуется довести до комнатной температуры. Если до согревания растворителя используется водяная баня, следует внимательно следить за тем, чтобы вода не вступала в контакт с резиновыми пробками или крышками флаконов. Температура водяной бани не должна превышать 37°С.

2. Удалить защитные крышки с флаконов с лиофилизатом и водой, продезинфицировать резиновые пробки обоих флаконов одной из дезинфицирующих салфеток.

3. Короткий конец двухконцевой иглы освободить от пластиковой упаковки, проткнуть им пробку флакона с водой и надавить вниз до упора.

4. Перевернуть флакон с водой вместе с иглой, освободить длинный конец двухконцевой иглы, проткнуть им пробку флакона с лиофилизатом и надавить вниз до упора. Вакуум во флаконе с лиофилизатом втянет воду.

5. Флакон с водой вместе с иглой отделить от флакона с лиофилизатом. Препарат быстро растворится; для этого флакон необходимо слегка покачивать. К применению допустим только бесцветный, прозрачный или слегка опалесцирующий раствор без осадка.

Правила приготовления и введения раствора

В качестве меры предосторожности необходимо контролировать ЧСС перед и во время введения Октаната. В случае выраженного ускорения пульса следует замедлить или прекратить введение препарата.

После растворения концентрата согласно инструкции, удалить защитное покрытие с фильтровальной иглы и ввести ее во флакон с концентратом. Удалить колпачок с фильтровальной иглы и присоединить шприц. Перевернуть флакон со шприцем вверх дном и втянуть раствор в шприц. Инъекции проводить в соответствии с правилами асептики и антисептики. Отсоединить фильтровальную иглу от шприца и присоединить вместо нее иглу-бабочку.

Раствор следует вводить в/в медленно со скоростью 2-3 мл/мин.

В случае использования более чем одного флакона Октаната можно использовать шприц и иглу-бабочку повторно.

Игла с фильтром предназначена только для одноразового использования. Следует всегда использовать иглу с фильтром для забора приготовленного раствора в шприц.

Любой неиспользованный раствор препарата следует утилизировать согласно существующим правилам.

Передозировка

Несмотря на то, что симптомов передозировки фактора свертывания крови VIII не наблюдалось, рекомендуется не превышать назначенную дозу.

Лекарственное взаимодействие

Данные о взаимодействии Октаната с другими лекарственными препаратами отсутствуют.

Беременность и лактация

Применение препарата при беременности и в период лактации возможно в случаях, когда ожидаемая польза терапии для матери превышает потенциальный риск для плода или грудного ребенка.

Побочные действия

Аллергические реакции: редко - ангионевротический отек, чувство жжения в области введения, озноб, приливы, крапивница (в т.ч. генерализованная), головная боль, снижение АД, апатичность, тошнота, рвота, беспокойство, тахикардия, чувство сдавления грудной клетки, одышка, повышение температуры, ощущение дрожи. Очень редко (<1/10 000) эти симптомы могут прогрессировать до развития тяжелой анафилактической реакции, включая шок.

У больных гемофилией А возможно развитие антител (ингибиторов) к фактору свертывания крови VIII (<1/1000). Наличие ингибиторов приводит к неудовлетворительному клиническому ответу на введение препарата. В таких случаях рекомендуется обращаться в специализированные гематологические/гемофильные центры. Неоходимо обследовать пациента на наличие антител с помощью соответствующих методов (тест Бетезда).

Условия и сроки хранения

Препарат следует хранить в защищенном от света и недоступном для детей месте при температуре от 2° до 25°С; не замораживать. Срок годности - 3 года.

Особые указания

При применении препарата возможно развитие реакций гиперчувствительности, как и при применении других инъекционнных препаратов белкового происхождения.

Помимо фактора свертывания крови VIII препарат также содержит следовые количества других белков крови. Ранними признаками реакций повышенной чувствительности являются крапивница, чувство сдавления грудной клетки, одышка, понижение АД и анафилаксия (тяжелая аллергическая реакция). В случае возникновения этих симптомов следует немедленно прекратить введение препарата. В случае развития шока следует применять современные методы противошоковой терапии.

В случае применения медицинских препаратов, полученных из человеческой крови или плазмы, возможность передачи инфекционных агентов не может быть полностью исключена. Это относится также к возбудителям неизвестных заболеваний. Тем не менее, риск передачи инфекционных агентов уменьшен благодаря следующим мерам:

— отбору доноров путем медицинского опроса и осмотра, а также скрининга плазменных пулов на наличие антигенов вируса гепатита В (ВГВ), антител к ВИЧ и к вирусу гепатита С (ВГС);

— анализу пулов плазмы на наличие генетического материала ВГС;

— процедурам инактивирования/удаления, включенным в процесс производства, которые были подтверждены на вирусной модели. Эти процедуры являются эффективными для ВИЧ, вируса гепатита А (ВГА), ВГВ и ВГС. Процедуры инактивирования/удаления могут иметь ограниченную эффективность в отношении безоболочечных вирусов, одним из которых является парвовирус В19. Парвовирус В19 может вызвать серьезные реакции у серонегативных беременных женщин (внутриутробная инфекция), а также у лиц с иммунодефицитом или повышенной продукцией эритроцитов (например, при гемолитической анемии).

При введении концентрата фактора свертывания крови VIII, полученного из плазмы, рекомендуется проведение вакцинации против гепатита А и гепатита B.

В случае возникновения аллергических реакций необходимо обследовать пациента на наличие ингибитора. У пациентов, имеющих ингибиторы фактора свертывания крови VIII, возможно повышение риска развития анафилактических реакций при последующем лечении Октанатом. Следовательно, первое применение указанного препарата согласно назначению лечащего врача должно быть проведено под медицинским контролем в условиях, обеспечивающих оказание квалифицированной медицинской помощи в случае возникновения аллергических реакций.

Не следует применять другие препараты во время введения Октаната.

Для введения Октаната следует применять только инъекционные приспособления, входящие в комплект упаковки. На внутренней поверхности некоторых инъекционных приспособлений возможна адсорбция фактора свертывания крови VIII, что приводит к снижению эффективности лечения.

Применение в детском возрасте

Применение возможно согласно режиму дозирования.