Общие тесты свертывания крови. Тест-система коагуляции Протромбиновое время по Квику и МНО

К основным тестом свертывания крови относят определение времени ее свертывания (по Ли-Уайту), время рекальцификации плазмы, показатель АЧТВ, время ретракции кровяного сгустка и некоторые другие параметры.

Время свертывания крови

Время свертывания крови по Ли-Уайту определяют как время которое проходит от момента забора крови из сосуда до образования кровяного сгустка.

Этот показатель является неспецифичным и характеризует свертывающую систему крови в целом.

Для проведения анализа один миллилитр крови набирается в пробирку (обычную или силиконовую) и выдерживается при температуре 37 градусов. В норме, в несиликоновой пробирке, кровь сворачивается за 5-7 минут, а в силиконовой – за 15-25.

Удлинение времени свертывания крови возможно в таких случаях:

• Анемия вследствие кровопотери.
• Патология тромбоцитов.
• Недостаток факторов свертывания в крови.
• Избыток разжижающих кровь веществ (антикоагулянтов).

Если кровь не сворачивается вообще, это, чаще всего, является признаком резкого дефицита фибриногена.

Уменьшение времени свертываемости крови встречается довольно редко.

Иногда определяют также индекс контактной активации. Этот показатель характеризует соотношения времени свертывания в силиконовой и несиликоновой пробирках и в норме колеблется от 1,7 до 3,0.

Увеличение индекса контактной активации возможно при нарушении функций печени, избыточном количестве антикоагулянтов, нарушении определенных звеньев гемостаза.

Время рекальцификации плазмы

Под временем рекальцификации плазмы подразумевается промежуток времени, который необходим для образования сгустка после добавления солей кальция. Нормальным показателем считается диапазон в одну-две минуты.

Исследуется также активированное время рекальцификации (каолиновое время или показатель АВР). От предыдущего этот параметр отличается методикой проведения анализа. Норма АВР – 50-70сек.

Удлинение времени рекальцификации возможно при:

• Недостатке тех или иных факторов свертывания крови
• Патологии тромбоцитов
• Избыточным содержанием антикоагулянтов

Уменьшение времени рекальцификации – признак повышенной активности свертывающей системы.

Активированное частичное тромбопластиновое время

Этот показатель также носит названия АЧТВ, АПТВ или каолин-кефалинового времени. Данный тест используется для определения функции плазменных факторов свертывания крови.

В норме АЧТВ составляет 35-45 секунд.

Увеличение АЧТВ более 45 секунд может наблюдаться при:

• Идиопатической тромбоцитопенической пурпуре
• Гемофилии
• Избытке антикоагулянтов
• Синдроме ДВС
• Некоторых болезнях печени

Уменьшение АЧТВ (менее 35 секунд) может быть признаком неправильной техники забора крови для анализа либо повышенной свертываемости крови.

Ретракция кровяного сгустка

Этот показатель используется для количественной оценки плотности образованного при свертывании крови сгустка.

Суть метода состоит в том, что крови дают свернуться, а затем оценивают соотношение между жидкой частью после образования тромба и исходным объемом взятой для анализа крови.

При определении стандартным методом ретракция кровяного сгустка находится в пределах 45-65%.

Уменьшение показателя ретракции возможно в случае:

• сниженного количества тромбоцитов
• повышенного количества эритроцитов
• некоторых наследственных заболеваниях

Повышенная ретракция сгустка встречается при анемиях и увеличении количества фибриногена в крови.

Коагулография и тромбоэластография

В некоторых лабораториях активность свертывающей системы крови определяется не по стандартным тестам коагулограммы, а с помощью специальных приборов (коагулографа или тромбоэластографа) которые позволяют получить графическое изображение процессов свертывания крови.

Анализ такого изображения (при соблюдении должной техники записи) позволяет наиболее точно оценить гемостаз.

При помощи тромбоэластографии определяют длительность трех основных фаз свертывания крови и некоторые специфические показатели.

Коагулография – высокоспецифичный метод при помощи которого можно определить продолжительность отдельных процессов свертывания.

Аутокоагулограмма

Аутокоагулограммой или аутокоагуляционным тестом называется относительно редко используемая методика исследования свертывающей системы.

Для проведения анализа в особым образом обработанную кровь с равными промежутками в течение часа добавляют специфический реагент, каждый раз определяя свертываемость крови. По полученным данным вычерчивается график. Этот график отображает взаимосвязь и равновесие между свертывающей и противосвертывающей системы крови.

При использовании сокращенной методики тестирование проводится в течение десяти минут.

Чаще всего метод построения и анализа аутокоагулограммы применяют при длительном использовании гепарина или для диагностики гемофилии.

Наиболее распространенные тесты (время свертывания цельной крови, время рекальцификации плазмы, толерантность плазмы к гепарину) позволяют судить лишь об общем состоянии ге­мостаза. Длительность времени свертывания крови (ВС) по Ли-Уайту находится в пределах 5-10 мин, нормальное фи­зиологическое значение толерантности плазмы к гепарину (ТП) по Сиггу - 9-13 мин, времени рекальцификации плазмы (ВР) по Бергерхофу - Рокку 90-120 с. Укорочение времени каждо­го из этих тестов свидетельствует о гиперкоагуляции, удлине­ние- о гипокоагуляции.

Тестами тромбоцитарной функции являются:

1. Время кровотечения (ВК). Нормальное время кровотече­ния по Дькжу составляет 1-3 мин. Увеличение ВК наблюдает­ся при болезни Виллебранда, тромбоцитопении, тромбоцитопатиях, после приема ацетилсалициловой кислоты. ВК в опреде­ленной степени отражает также функцию и контрактильную способность сосудистой стенки.

2. Число тромбоцитов. Нормальное содержание тромбоци­тов 150-400-10 9 /л. Тромбоцитопения может считаться непо­средственной причиной кровотечения при снижении числа тром­боцитов до 50-10 9 /л и ниже.

3. Агрегация тромбоцитов. Если к плазме, обогащенной тромбоцитами и хорошо перемешанной, добавить АДФ, то тромбоциты начинают образовывать агрегаты и конгломераты. При постоянной концентрации АДФ выраженность агрегаций зависит от числа тромбоцитов, способности их к агрегации, на­личия плазменных факторов коагуляции, в частности фибрино­гена. Таким образом, при перечисленных условиях тест позво­ляет получить представление об агрегационных способностях тромбоцитов и, следовательно, оценить степень возможного участия качества тромбоцитов в процессе гемостаза и при гиперкоагуляционном состоянии.

4. Фактор 3 тромбоцитов. Тест потребления протромбина (см. ниже) наиболее прост для оценки активности фактора 3. Нормальные тромбоциты вызывают постепенное укорочение времени свертывания, которое колеблется между 20 и 40 мин.

Тесты на активность факторов коагуляции :

1. Протромбиновое время (тест Квика) (ПВ). В норме со­ставляет 12-14 с. Продолжительность теста 15 с принимается за 100% (протромбиновый индекс). Тест позволяет оценить активность факторов внешнего механизма свертывания крови. Укорочение ПВ (увеличение протромбинового индекса) свиде­тельствует об усилении тромбообразования в крови и увеличе­нии тромбогенной опасности. Гепарин, поскольку он дает глав­ным образом антитромбиновый эффект, обесценивает протром­биновый тест. Показатель теста можно считать условно достовер­ным только через 5 ч после последнего введения гепарина. Ис­пользование тканевых прокоагулянтов при выполнении про­тромбинового теста нивелирует роль факторов VIII, IX, XI и тромбоцитов в ходе коагуляционного процесса. В связи с этим протромбиновый тест в таких условиях дает возможность оце­нить дефицит факторов II, V, VII, X и фибриногена. Заболева­ния печени, дефицит витамина К проявляются удлинением ПВ. Наблюдается также увеличение ПВ в поздних стадиях ДВС-синдрома. ПВ является наиболее точным методом контро­ля эффективности терапии антикоагулянтами непрямого дей­ствия.

2. Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ). Представляет собой тест, отражающий совокупность активности всех факторов внутреннего механизма свертыва­ния крови. Определяемое по Раппопорту АЧТВ в норме состав­ляет 22-40 с. Укорочение АЧТВ является признаком усиления тромбопластической активности крови и повышенного темпа образования тромбина в крови. Удлинение АЧТВ наблюдается при гемофилии, циррозе печени, применении антикоагулянтов прямого действия, а также ДВС-синдроме, сопровождаемом «потреблением» факторов коагуляции крови. Хотя тест АЧТВ чувствителен к дефицитам всех факторов коагуляции, за ис­ключением фактора VII, обычно он используется для того, что­бы определить степень участия в процессах коагуляции первых стадий механизма коагуляции, т. е. тех, которые контролируют­ся факторами XII, XI, IX и VII.

Как видно из изложенного, протромбиновое время по Квику не отражает дефектов коагуляции в I стадии (период генера­ции тромбопластина), определяемых дефицитом факторов вну­треннего механизма. Тест АЧТВ, выполненный в сочетании с ПВ, позволяет отличить дефекты коагуляции в I стадии от дефектов коагуляции во II стадии (образование тромбина), когда проявляют активность факторы II, X, V и когда прояв­ляется уже развившаяся активность фактора VII, или в III ста­дии, когда из фибриногена образуется фибрин. Удлинение АЧТВ при нормальном ПВ неоспоримо указывает на дефицит одного из факторов в I стадии.

3. Тест потребления протромбина. Превращение протромби­на в тромбин (потребление протромбина) является функцией скорости появления в крови протромбинпревращающих факто­ров во время активного процесса образования сгустка. Осно­вой теста является сравнение содержания протромбина в сыво­ротке крови через 1 ч после образования сгустка с содержани­ем протромбина в исходной плазме, из которой получен сгусток. Отклонения от нормы могут отмечаться при состояниях, кото­рые характеризуются дефицитом факторов, ответственных за развитие комплексов, превращающих протромбин в тромбин. Это факторы VIII, IX, X, XI, XII, а также тромбоциты и фак­тор V. Тест позволяет отличить дефицит всех предшественников в генерации активного фактора X (Ха) и, следовательно, само­го фактора X от дефицита фактора VII, поскольку для пробы, осуществляемой in vitro, фактор VII не требуется. Таким об­разом, у больного с дефицитом фактора VII тест потребления протромбина будет нормальным при удлиненном ПВ. Наоборот, у больного с дефицитом фактора X будет наблюдаться удли­ненное ПВ при сниженном тесте потребления протромбина.

Тесты, характеризующие фибриноген, фибринолиз и действие гепарина:

1. Тромбиновое время (ТВ) по Сирмаи (норма 25-30 с) может отражать изменения концентрации и структуры фибри­ногена. Оно может быть увеличено введением гепарина и повы­шением уровня в крови продуктов деградации фибриногена или фибрина (ПДФ). При потреблении фибриногена в условиях ДВС-синдрома ТВ удлиняется. Протамин не удлиняет ТВ. У больных с острым первичным фибринолизом наблюдается ускоренный лизис сгустка, полученного при постановке теста ТВ. При этом фибриновый сгусток не должен начать раство­ряться раньше чем через 5 мин.

2. Рептилазное время (РВ). Удлинение РВ (норма 20-22 с) наблюдается при гипофибриногенемии или при увеличе­нии содержания ПДФ, в частности при ДВС-синдроме или вто­ричном фибринолизе. Поскольку гепарин не влияет на РВ, сравнение последнего с ТВ или ПВ может быть показателем участия гепарина в сдвигах гемокоагуляции.

Оценка фибринолиза .

1. Время лизиса эуглобулино-вого сгустка по Ковальскому должно составлять в норме 4-5 ч. Укорочение его до 1-2 ч (вместе с появлением ПДФ) указы­вает на повышение активности фибринолитической системы.

2. Продукты деградации фибрина (фибриногена) (ПДФ). В норме содержание ПДФ не должно превышать 10 мкг/мл. Повышение концентрации ПДФ всегда указывает на процесс фибринолиза, который может быть первичным, обусловленным повышением уровня плазмина (фибринолизина), или вторич­ным как результат непрерывного избыточного образования фиб­рина или его аномальных форм, в частности при ДВС-синдро­ме. Поздние стадии ДВС-синдрома характеризуются высокой концентрацией ПДФ (свыше 80-100 мкг/мл).

3. Количественное определение плазминогена и плазмина основано на использовании теста на фибриновой пленке и счи­тается чувствительным и точным показателем фибринолиза. Патологический фибринолиз может быть точно диагностирован только в течение 24 ч. В связи с этим в клинической практике метод не имеет практической ценности. Вместе с тем он может быть полезен при оценке эффективности антифибринолитиче-ской терапии с помощью е-аминокапроновой кислоты.

Рис. 6.1. Основные тесты, характеризующие состояние гемостаза.

Сплошные стрелки - АЧТВ, пунктирные - протромбиновое время, штрихпунктир-ная - тромбиновое и рептилазное время, светлая - время лизиса эуглобулинового сгустка.

Оценка антитромботической активности . Уровень антитромбина-III ниже 80% свидетельствует о потреб­лении этого фактора, которое может быть связано с развитием ДВС-синдрома. Это один из самых чувствительных показателей развития внутрисосудистого свертывания крови. К сожалению, проба на антитромбин-Ш в присутствии гепарина и ПДФ в крови становится невозможной. Концентрация антитромбина-III иногда зависит от гемодилюции, поэтому необходимо тракто­вать его осторожно и всегда учитывать уровень гематокрита, при котором оценивается этот фактор.

Таким образом, описанные тесты (рис. 6.1) могут дифферен­цированно отражать дефекты гемокоагуляционного процесса и фибринолиза на различных уровнях.

Ход процесса свертывания крови и последующего лизиса образующегося сгустка может быть оценен также методом тромбоэластограммы (ТЭГ), получаемой с помощью специаль­ного прибора - тромбоэластографа. ТЭГ дает довольно широ­кое представление о ходе коагуляционного процесса и коагуля-ционном потенциале. Следует помнить, что антикоагулянтная терапия существенно меняет ТЭГ и в ряде наблюдений делает ее результаты недостоверными.

Варианты расстройств системы гемостаза

Клиническая ориентировка в диагностике . У большинства боль­ных с врожденными расстройствами гемостаза болезнь прояв­ляется еще в детском возрасте. Обычно после незначительных травм, экстракции зубов, при малых оперативных вмешатель­ствах возникают неостанавливаемые или с трудом останавли­ваемые кровотечения. При подозрении на врожденные анома­лии гемокоагуляции больного необходимо тщательно обследо­вать, а также провести гематологическое обследование членов семьи.

Кровотечение, возникшее вследствие патологического состоя­ния тромбоцитов или их дефицита в крови, может быть оста­новлено продолжительным давлением в месте повреждения и обычно после этого не возобновляется. В противоположность этому при кровотечениях, обусловленных дефектами коагуляци­онного процесса, т. е. когда невозможно образование сгустка или замедление его образования и повышен фибринолиз, дав­ление в месте повреждения сосуда эффекта не дает. Прекра­тившись, такое кровотечение, как правило, вскоре возобновля­ется (обычно из-за лизиса сгустка). Подобные кровотечения нередко возникают через несколько часов после операции и бывают не слишком интенсивными. Это классический вариант кровотечения, обусловленного расстройствами коагуляции кро­ви. Если не проводится лечение, то такое кровотечение может продолжаться буквально сутками. Другой характерной чертой подобных кровотечений является отсутствие образования сгуст­ка излившейся крови.

Хирургические кровотечения (если у больного коагуляционная система в норме) развиваются весьма драматично, с высо­кой начальной интенсивностью и никогда не бывают генерали­зованными, т. е. не сопровождаются кровотечением из мест уколов при инъекциях в других областях тела (если не ослож­няются ДВС-синдромом).

Патология тромбоцитов. Основными лабораторными теста­ми для оценки роли тромбоцитов в процессе гемокоагуляции являются подсчет тромбоцитов в камерах и определение вре­мени кровотечения. При нормальных показателях этих тестов можно быть уверенным, что кровотечение не связано с рас­стройством функции тромбоцитов или их дефицитом. Нормальное содержание тромбоцитов в крови 150-400-10 9 /л. Спонтанные кровотечения, обусловленные дефицитом тромбоцитов, возни­кают тогда, когда количество тромбоцитов существенно сни­жается и достигает 50-20-10 9 /л. Обычно наблюдаются крово­точивость слизистых оболочек, например рта, десен, петехиаль-ные высыпания в местах давления на кожу, например после наложения жгутов на конечности или измерения артериального давления с помощью манжетки сфигмоманометра. Время кро­вотечения обычно удлиняется при снижении числа тромбоцитов до уровня ниже 100-10 9 /л.

Тромбоцитопения может быть результатом снижения про­дукции костного мозга, избыточной периферической утилиза­ции, или деструкции клеток, или их активного поглощения уве­личенной селезенкой. Продукцию тромбоцитов можно оценить путем подсчета числа мегакариоцитов в пунктате костного моз­га. Снижение числа тромбоцитов в сочетании с уменьшением числа мегакариоцитов может свидетельствовать об апластиче-ской анемии или злокачественной инфильтрации костного моз­га при лейкемическом или вторичном раковом процессе.

Утилизация (потребление) тромбоцитов может иметь; место также при ДВС-синдроме, когда в формирующиеся внутри со­судов тромбы включается большое число тромбоцитов, а кост­ный мозг не успевает их продуцировать. Существуют и другие зоны потребления тромбоцитов, например образование внутрисосудистых гиалиновых тромбов при тромботической тромбо-цитопенической пурпуре или гемолитическом уремическом синд­роме.

Тромбоцитопения может быть также обусловлена актива­цией тромбоцитов и их последующей утилизацией в результате дефицита простациклина. Трансфузия плазмы или ее замена может прервать процесс избыточной тромбоцитарной активно­сти, поскольку при этом в кровь поступает достаточное коли­чество плазменных факторов, способствующих высвобождению простациклина из сосудистой стенки {Byrnes J. S., Liam E., 1979].

Иммунные механизмы также играют роль в процессах изме­нения физиологической активности тромбоцитов и в процессах их потребления. На оболочке тромбоцитов находятся аутоантитела иммуноглобулинов класса G [Идельсон Л. И., 1980]. Это обусловливает их преждевременную деструкцию и фагоцитов преимущественно макрофагами в селезенке и печени. Такие антитела могут быть определены радиоиммунными методами. В большинстве случаев острая иммунная Тромбоцитопения вы­зывается каким-либо острым заболеванием, например острой бактериальной или вирусной инфекцией, однако может сущест­вовать и в хроническом варианте (как идиопатическое забо­левание) или сопровождать системную красную волчанку и хро­ническую лимфоидную лейкемию.

Тромбоцитопения может быть обусловлена и лекарственны­ми веществами. В плазме крови лекарства или их метаболиты могут образовывать комплексы с белками, которые способны проявлять себя как антигены. На поверхности тромбоцитов об­разуются антитела к иммуноактивным комплексам антигенов. Происходит вторичная адсорбция комплексов на поверхности тромбоцитов, преждевременно разрушающая их. Как известно, нормальная продолжительность жизни тромбоцитов около 10 дней. В случаях иммунных конфликтов продолжительность жизни тромбоцитов укорачивается до нескольких дней, а в большинстве случаев - до нескольких часов.

Нормальная селезенка взрослого человека (масса 150- 200 г) способна аккумулировать одновременно около 30%, тромбоцитной массы. В норме эта аккумулированная часть на­ходится в постоянном обмене с массой циркулирующих в кро­ви тромбоцитов. При патологическом увеличении селезенка спо­собна потреблять значительно большее число тромбоцитов, осо­бенно если продукция их в костном мозге повреждена каким-либо патологическим процессом. Возникает Тромбоцитопения.

Во всех случаях патологической и необъяснимой кровоточи­вости кожи или слизистых оболочек следует исключить пато­логию тромбоцитов, даже если общее число их в перифериче­ской крови не изменено. Расстройства функционального состоя­ния тромбоцитов могут быть первичными, связанными с каким-либо изменением качества самих тромбоцитов, например с изме­нением их метаболизма, или вторичными, возникающими в ре­зультате основного заболевания, например сепсиса.

Основными функциональными качествами тромбоцитов, как известно, являются их способность прилипания к поврежденной, поверхности, т. е. адгезия, склеивание между собой, т. е. агре­гация, выделение образовавшейся массой факторов, которые инициируют процесс коагуляции фибриногена, и веществ, спо­собствующих последующей ретракции образовавшегося сгуст­ка. Следовательно, функции тромбоцитов чрезвычайно много­образны. Расстройства этих функций врожденного или приобре­тенного характера могут существенно расстроить весь процесс коагуляции крови и гемостаза. Такие расстройства хорошо описаны R. M. Hardisty (1977).

Тромбоциты могут приклеиваться к коллагеновой и неколлагеновой поверхности эндотелия. Для адгезии к коллагену ко­фактор не требуется. При врожденном синдроме Элерса-Данлоса наклонность к кровотечениям связана с тем, что нормаль­ные тромбоциты не могут достаточно прочно соединиться с патологически измененной структурой коллагена . Адгезия тромбоцитов к неколлагеновым структу­рам зависит от их взаимодействия с двухвалентными катио­нами (прежде всего Са 2+), фибриногеном и фактором Виллебранда. Таким образом, дефекты процесса адгезии тромбоцитов к поврежденной поверхности могут быть связаны с патологией фибриногена, болезнью Виллебранда, гипокальциемией, дефектами самой мембраны тромбоцитов.

Описана также группа патологических синдромов, обуслов­ленных дефицитом сиаловой кислоты и гликопротеина I в обо­лочке тромбоцитов. Эта группа патологических состояний, объ­единенных общим названием «синдром Бернара - Сулье», харак­теризуется тромбоцитопенией и потерей адгезивной способности тромбоцитов из-за отсутствия на их оболочке рецепторов фак­тора Виллебранда. В лабораторных условиях заболевание мо­жет быть установлено при выявлении потери тромбоцитами спо­собности адгезироваться на стандартизированной стеклянной поверхности или поврежденной интиме аорты крысы в перфузионной камере.

После адгезии коллаген, тромбин и АДФ связываются со специфическими рецепторами на оболочке тромбоцита и таким образом активируют ферментную систему, которая высвобож­дает свободную арахидоновую кислоту из связанных с мембра­ной фосфолипидов. Арахидоновая кислота под влиянием цикло-оксигеназы превращается в эндопероксид, который является предшественником тромбоксана А 2 и других простагланДинов. Эндопероксид, инициирующий реакцию высвобождения из плот­ных гранул и тромбоксана А 2 ,- наиболее мощный активатор агрегации тромбоцитов. Эти реакции показаны на схеме 6.3. Возможно, существуют другие механизмы агрегации, которые не зависят от метаболизма арахидоновой кислоты. Это актива­ция коллагеном и большими количествами тромбина, Са 2+ и, на­конец, тромбоцитоактивирующим фактором .

Тромбастения (или болезнь Гланцманна-Негели) пред­ставляет собой врожденный дефицит гликопротеина II на мем­бране тромбоцита, в результате которого нарушается агрегация тромбоцитов при сохраненной способности к адгезии и ристо-цетинобусловленной способности их к агрегации [Баркаган 3. С., 1980].

Врожденный дефицит ферментов циклооксигеназы или тром-боксансинтетазы встречается очень редко, но приобретенный дефицит циклооксигеназы наблюдается чаще. Действие ацетил­салициловой кислоты - его классический пример. Эта кислота необратимо ингибирует циклооксигеназу путем ее ацетилирова-ния . Поскольку циркулирующие тромбоци­ты не способны самостоятельно синтезировать этот белок, дей­ствие разовой дозы ацетилсалициловой кислоты продолжается до полного исчезновения старых тромбоцитов и замены их но­выми, т. е. практически до 10 дней. В клинической практике после приема 300 мг ацетилсалициловой кислоты нарушение агрегационной и адгезивной функций тромбоцитов и возможная наклонность к кровотечениям могут поддерживаться 4-7 дней, т. е. в течение периода, необходимого для наработки костным мозгом достаточного количества мегакариоцитов и появления достаточного количества тромбоцитов новой генерации.

Некоторые лекарственные вещества, например индометацин и другие нестероидные противовоспалительные средства, ингибируют циклооксигеназу, но кратковременно, и геморрагическая тенденция после их приема может продолжаться не более 24 ч. Агрегационная способность может быть оценена на агрегометре по результатам воздействия индуцирующих агрегацию веществ на плазму, обогащенную тромбоцитами.

Известны две группы врожденных дефектов освобождения. Одна из них связана с полным отсутствием плотных гранул и содержащейся в них АДФ, другая - с недостаточностью ме­ханизмов освобождения плотных гранул тромбоцитов, несмотря на достаточное количество самих гранул.

В клинических условиях кровотечения могут быть связаны с рядом различных отклонений в функциональной активности тромбоцитов. При уремии, например, это чаще всего нарушения адгезивной и агрегационной способности тромбоцитов . Возможно, что такие расстройства связаны с мно­жеством факторов. Нельзя исключить также влияние различ­ных диализируемых субстанций на функциональную активность поверхности тромбоцитов.

В настоящее время известен ряд плазменных факторов, которые стимулируют освобождение простациклина из эндоте­лия сосудистой стенки и, следовательно, способны ингибировать адгезивную и агрегационную активность тромбоцитов . Простациклин ингибирует агрегацию тром­боцитов путем связывания со специфическим мембранным ре­цептором, который повышает внутриклеточное содержание цАМФ. Последний тормозит синтез тромбоксана А 2 .

В расстройствах тромбоцитарных функций могут играть роль и нарушения миелопролиферативных процессов. Появле­ние тромбоцитов из злокачественно измененного клона мегака­риоцитов предполагает возможность нарушений ферментатив­ных функций таких тромбоцитов . Полицитемия и увеличение эритроцитной массы или тромбоцитоз могут быть причиной парадоксального сочетания тромбозов и кровотечений. При этом повышение вязкости крови ухудша­ет кровоток и предрасполагает к тромбозам, а дефекты тромбоцитарной мембраны обусловливают геморрагическую тен­денцию.

У больных с гипергаммаглобулинемией происходит адсорб­ция гамма-глобулина на поверхности тромбоцитов. Возникает повышенная наклонность тромбоцитов к агрегации и адгезии и следовательно, к тромбозам. Это наблюдается при макроглобулинемии Вальденстрема, множественной миеломе, системной красной волчанке. Известны также нарушения функции тром­боцитов при цинге, пернициозной анемии, болезнях печени (осо­бенно при печеночной недостаточности), клапанных пороках сердца. Описаны расстройства тромбоцитарной функции после переливания низкомолекулярных декстранов и гидроксиэтилкрахмала.

Тромбоцитемия начинает клинически проявляться тогда, ког­да число тромбоцитов превышает 900-700-10 9 /л. Резко возрас­тает риск тромбозов и тромбоэмболии, особенно артериальных сосудов. Тромбоцитемия может быть первичной, вследствие злокачественной гиперпродукции костным мозгом мегакариоци-тов, или вторичной, как реакция на какие-либо патологические состояния, например обширную травму, оперативное вмешательство, инфаркт миокарда, коллагенозы, лимфоматозы. У ря­да больных выраженная тромбоцитемия возникает после спленэктомии. В связи с этим очевидно, что нормализация числа тромбоцитов должна быть достигнута как можно быстрее, же­лательно путем устранения индуцирующего фактора. Возможны также другие лечебные мероприятия. Производят контролируе­мую сепарацию тромбоцитов, применяют методы подавления функции костного мозга бисульфаном или подавление функцио­нальной активности тромбоцитов ацетилсалициловой кислотой. Все это существенно снижает риск тромбозов.

Тромбоцитопения имеет множество причин. При необходи­мости лечения тромбоцитопенических кровотечений иногда ис­пользуют трансфузию цельной свежей крови, однако предпоч­тительнее трансфузия тромбоцитной массы. Необходимость ле­чения тромбоцитопении в клинических условиях возникает в тех случаях, когда число тромбоцитов становится меньше 50-10 9 /л. Однако следует помнить о технических трудностях. Это прежде всего быстрая потеря функциональной активности тромбоцитов при их хранении после забора и сепарации. Обыч­но функциональная активность их остается удовлетворительной не более 48-72 ч. Тромбоциты, хранимые при температуре 4 С, имеют короткие сроки жизни после переливания и эф­фективны не более 24 ч . Их предпочтительнее использовать для лечения острых кровотече­ний или их последствий. Если тромбоциты хранятся при темпе­ратуре 22 °С, то продолжительность их жизни после перелива­ния (и эффект) увеличивается примерно до 48-72 ч. Более целесообразно производить их переливание некровоточащим больным с тромбоцитопенией

Нарушения коагуляционной функции. Как уже указывалось, ориентировочную информацию о первичном звене расстройства коагуляции как причины геморрагического синдрома можно по­лучить, применяя скрининговые тесты. Каждый из трех при­веденных тестов способен в наибольшей степени отражать уз­кий диапазон дефекта, поскольку характеризует один из трех механизмов образования сгустка: внутренний, внешний и непо­средственный механизм превращения фибриногена в фибрин. Следовательно, специфичность каждого из тестов для отдель­ных факторов коагуляции можно представить следующим об­разом (табл. 6.2).

Таблица 6.2. Информативность коагуляционных тестов для отдельных факторов свертывания *

* См. также рис. 6.1.

АЧТВ максимально отражает более ранние стадии образо­вания сгустка, т. е. те, на которых начинается действие фак­торов внутреннего механизма - XII, XI, IX, наконец, VIII. На­оборот, сдвиги ПВ в большей степени отражают более поздние этапы коагуляции крови - образование фактора Ха, дефицит фактора V (акселератор), недостаток протромбина или дефи­цит (избыток) фибриногена.

Если обнаружено удлинение АЧТВ, подтверждающееся при повторных постановках теста с использованием 50% смеси плазмы больного и нормальной плазмы, то это может свиде­тельствовать о дефиците какого-либо из названных факторов или их ингибиции, например иммуноглобулином G, который инактивирует один из коагуляционных белков. Дефицит плаз­менных факторов можно корригировать инфузией нормальной плазмы, тогда как ингибирующее влияние иммуноглобулина корригировать трансфузией плазмы нельзя и удлинение АЧТВ останется прежним.

Причины дефицита коагуляционных факторов различны. Он может быть связан с нарушением или полным прекращением синтеза коагуляционных протеинов в печени, качественными нарушениями молекул белков, из которых образуется коагуляционный протеин, или, наконец, с дефицитом ферментов, не­обходимых для синтеза. Дефицит коагулирующих факторов нередко связан с повышенным потреблением фактора в коагуля-ционном процессе, в частности при ДВС-синдроме, наконец, при инактивации факторов циркулирующими в крови патогенными антителами или ингибиторами [,Machin S. J., 1983].

Все факторы коагуляции крови, кроме VIII (антигемофильный глобулин), синтезируются в печени. Фактор VIII образу­ется в эндотелиальных клетках как антиген и приобретает коа-гуляционную активность уже в кровотоке. Точная последова­тельность этого процесса неизвестна, однако предполагается, что происходит образование комплекса с какими-то низкомоле­кулярными субстанциями .

Врожденные расстройства коагуляции. Опи­саны различные состояния, связанные с дефицитами коагуляци-онных факторов, но все они весьма редки, за исключением ге­мофилии, болезни Кристмаса (гемофилия В) и болезни Вил-лебранда. Гемофилия и болезнь Кристмаса передаются как сцепленный с полом рецессивный признак. Болезнь Виллебранда обычно обусловлена передачей аутосомного доминантного признака. Все остальные врожденные болезни коагуляции кро­ви являются, как считают, аутосомными рецессивными.

Классическая гемофилия является результатом синтеза пато­логической молекулы фактора VIII, не проявляющей специфи­ческой биологической активности, но повышающей уровень иммунологически активных веществ (антиген). Содержание тром­боцитов в крови обычно нормальное, так же как их функция . Клинически тяжесть заболевания обычно тесно коррелирует с дефицитом нормального фактора VIII. При дефиците его менее 50% признаки болезни, как правило, от­сутствуют. При наличии его менее 5% нормы развиваются про­должительные эпизоды кровотечения, которые трудно контроли­руются. Характерны гемартрозы. При полном отсутствии фак­тора VIII, если не проводится специальная терапия, очень часты тяжелые спонтанные кровотечения после незначительных повреждений. Иногда возможен смертельный исход.

Основой терапии гемофилии (гемофилических кровотечений) является возмещение дефицита фактора VIII донорским препа­ратом. Благодаря такой профилактической терапии стала воз­можной нормальная жизнь тяжелобольных. Поскольку продол­жительность жизни донорского фактора VIII в крови больного невелика и через 10-14 ч остается половина перелитой дозы, для уверенного контроля в случаях острого кровотечения необ­ходимо двукратное в течение суток введение донорского пре­парата.

Криопреципитат готовят из свежей крови, лиофилизируют и многократно фракционируют для получения концентрата. При­готовленные концентраты чисты, имеют дозированную актив­ность фактора VIII в малом объеме и могут быть легко вве­дены самостоятельно в домашних условиях. Однако при вве­дении антигемофильных препаратов высок риск заболевания вирусным гепатитом, хроническим заболеванием печени, приоб­ретения аллоантител к эритроцитам, тромбоцитам, HLA и плаз­менным белковым антигенам .

В последние годы лечение и поддержание больных с гемо­филией осложняет проблема СПИДа. Приблизительно у 5-10% больных гемофилией постепенно увеличивается количество ин­гибиторов фактора VIII, развивается резистентность к лечению криопреципитатами и лиофилизированными концентратами. Эпизоды кровотечений становятся чаще и в конце концов воз­никает необходимость применения стероидных препаратов, иммуносупрессоров, интенсивного плазмообмена, применения бычь­его или свиного фактора VIII или очень высоких доз человече­ского фактора VIII .

Весьма сходна с истинной гемофилией ситуация при болезни Кристмаса (дефицит фактора IX - антигемофильного фактора В), при которой также наблюдается тенденция к спонтанным кровотечениям. Период полураспада фактора IX в циркули­рующей крови довольно короткий (до 24 ч), поэтому лечение болезни Кристмаса предпочтительнее проводить с использова­нием свежезамороженной плазмы и концентратов фактора IX.

Болезнь Виллебранда характеризуется продолжительным временем кровотечения, снижением адгезивной способности тромбоцитов, уменьшением содержания коагулоактивного фак­тора VIII и его иммунной антигенной активности . При классической болезни Виллебранда одновременно снижаются все три показателя активности фактора VIII, хотя описано, например, состояние, при котором нормальное содер­жание антигена сочеталось со снижением адгезивной активно­сти тромбоцитов и изменением их электрофоретической активно­сти. У некоторых больных с синдромом Виллебранда в молекуле фактора VIII уменьшается содержание одного из углеводов, в результате чего тормозятся процессы адгезии и ристоцетиновой агрегации. Некоторые приобретенные формы болезни Вилле­бранда могут возникать у больных с аутоиммунными заболева­ниями . У них накапливаются анти­тела, которые преципитируют часть молекулы фактора VIII и нарушают нормальный процесс адгезии тромбоцитов. Обычно наблюдаются лимфоматозы и коллагенозы. Наиболее эффектив­ны при лечении подобных больных криопреципитаты и менее эффективны концентраты фактора VIII.

Как уже указывалось, другие врожденные расстройства функции плазменных факторов свертывания крови встречаются реже. Они могут быть достаточно просто выявлены скрининговыми тестами. Обычно их лечение связано с необходимостью возмещения недостающего фактора, и это, как правило, может быть достигнуто инфузией свежезамороженной плазмы. Скри-нинговым методом не удается выявить дефицит фактора XIII (фибринстабилизирующий фермент), поскольку дефицит обна­руживается не ранее 2-3 сут после образования фибринового сгустка. Дефицит фактора XIII диагностируют обычно по уско­ренному лизису образовавшегося сгустка в моче.

Дефицит витамина К. Жирорастворимый витамин К необхо­дим для синтеза печенью факторов II (Протромбина), VII, IX и X. В связи с этим названные факторы принято именовать витамин-К-зависимыми. Витамин К синтезируется в кишечнике при участии кишечных бактерий. Его абсорбция в кишечнике происходит с участием желчи. Витамин К действует путем кар-боксилирования глутаминовых остатков молекул аминокислот . Механизм действия его заключается в связывании одного из названных факторов с поверхностью фосфолипида в присутствии Са 2+ . Благодаря этому фактор стано­вится функционально активным и участвует в процессах даль­нейшего каскада, т. е. превращается из профермента в фермент. При дефиците и в отсутствие витамина К печень синтези­рует неполноценные белки, которые не способны связываться с поверхностью фосфолипида. В печени образуется некоторое количество иммуноактивных аминокислотных соединений, кото­рые сходны с нормальными белками и могут быть выявлены иммунологическими методами. В иностранной литературе эти соединения названы PIVKA (протеины, вызванные отсутствием витамина К или антагонизмом к нему). Сами по себе они так­же могут несколько ингибировать коагуляционный процесс. Их появление в крови неопровержимо свидетельствует об отсут­ствии витамина К. Однако при заболеваниях печени, приводя­щих к нарушению синтеза белков, продукция PIVKA прекра­щается. Если уровень витамина К в организме снижается, то активность витамин-К-зависимых факторов снижается со скоростью, соответствующей периоду их полураспада в крови (фактора VII-2-4 ч, IX -25 ч, фактора X -40 ч, факто­ра II -60 ч).

У новорожденных в течение первых 3-5 дней имеется де­фицит витамин-К-зависимых факторов из-за функциональной незрелости печени и сниженных запасов витамина К (стериль­ность кишечника и отсутствие витамина К в материнском мо­локе). Введение ребенку 1 мг витамина K 1 полностью подавляет геморрагический синдром. Большие дозы витамина К неже­лательны, так как могут вызвать гемолитическую желтуху из-за дефицита гликолитических ферментов.

Дефицит витамина К наблюдается у больных с механиче­ской желтухой, поскольку желчь у них не попадает в область образования витамина - в кишечник. Среди других причин дефицита витамина К могут быть названы язвенный стоматит, длительная диарея, фиброзный цистит, длительное лечение ми­неральными маслами (вазелин). Стерилизация кишечника, на­пример длительное применение антибиотиков, также снижает синтез витамина К. Для коррекции этих состояний необходимо внутривенное введение 10 мг витамина K 1 ежедневно в тече­ние недели.

Длительный прием производных кумарина (пелентан, фенилин) внутрь также ингибирует активирующее действие витами­на К на факторы II, VII, IX, X. Поскольку существует множест­во лекарственных веществ, которые при комбинации с кумариновыми препаратами могут либо усиливать, либо ослаблять их действие, необходим контроль за эффективностью лечения кумаринами с применением ПВ-теста. Если передозировка кумариновых препаратов приводит к ятрогенному кровотечению, то больному необходимо ввести свежезамороженную плазму или концентрат протромбинового комплекса.

Плазменные факторы свертывания крови.

Фактор I - фибриноген - белок, находящийся в плазме в растворенном состоянии. В процессе свертывания крови он становится нерастворимым, образуя фибрин.

Фактор II - протромбин - белок плазмы - неактивный предшественник тромбина. Тромбин (IIа) способствует превращению фибриногена в фибрин, активирует тромбоциты, из которых под его влиянием освобождаются клеточные факторы свертывания.

Фактор III - тканевой тромбопластин (тканевой фактор) - липопротеид, который освобождается при повреждении тканей, поступая в плазму крови, он воздействует на протромбин, превращая его в тромбин. Аналогичным действием обладает тромбокиназа плазмы.

Фактор IV - ионизированный кальций.

Фактор V - проакцелерин, Ас-глобулин, лабильный фактор, акцелератор превращения протромбина.

Фактор VI - акцелерин - белок глобулиновой природы, ускоряющий превращение протромбина в тромбин.

Фактор VII - проконвертин, стабильный фактор, неактивная форма фермента конвертина.

Фактор VIII - антигемофильный глобулин, принимает участие в образовании тромбокиназы.

Фактор IX - фактор Кристмаса, антигемофильный глобулин-В - катализирует образование тромбокиназы.

Фактор Х - фактор Стюарта-Прауэра, участвует в образовании тромбокиназы и непосредственно в превращении протромбина в тромбин.

Фактор ХI - фактор Розенталя - ускоряет образование тромбокиназы.

Фактор XII - фактор Хагемана, контактный фактор.

Фактор ХIII - фибринстабилизирующий фактор, фибриназа, участвует в переходе растворимого фибрина в нерастворимую форму.

Кроме плазменных, в свертывании участвует ряд клеточных факторов, выделяемых форменными элементами крови.
Первостепенную роль играют тромбоцитарные факторы. Обозначаются они как Р1, 2, 3, 4, РII. При агрегации тромбоцитов из них выделяются вещества, которые ускоряют процесс свертывания крови. Наибольшее значение для свертывания имеет тромбоцитарный фактор 3 (фосфолипид).

Большинство из вышеперечисленных ферментов синтезируется в печени. Для синтеза факторов II, VII, IX и Х необходим витамин К.

Свертывание крови условно протекает в 3 фазы.

Фаза 1 - формирование активной протромбокиназы.

Имеются 2 механизма активации свертывания крови - “внешний” (при поступлении в кровь тканевого тромбопластина) и “внутренний” (без тканевого тромбопластина).

При внешнем механизме активации фактор III (из поврежденных тканей или разрушенных форменных элементов) вступает во взаимодействие с фактором VII и в присутствии ионов кальция быстро образует активатор фактора Х. Активированный фактор Х (Ха) в комплексе с фактором V, фактором 3 тромбоцитов и ионами кальция трансформируют протромбин.

Во внутреннем механизме участвуют факторы ХII, ХI, IХ, VIII наряду с факторами Х, V, тромбоцитарным фосфолипидом и ионами кальция, которые являются общими для обоих механизмов.
Каскад свертывания состоит в следующем: контакт крови с чужеродной поверхностью (например, стекло пробирки при запуске механизма in vitro) активирует фактор XII, который активирует фактор ХI, тот в свою очередь фактор IХ. Активированный фактор IХ (IХа) в присутствии фосфолипида, ионов кальция и фактора VIII активирует фактор Х. Активированный фактор Х (Ха) в сочетании с фосфолипидом, фактором V и кальцием (протромбокиназа) участвует в превращении протромбина.

Фаза 2 - тромбинообразование - состоит в превращении протромбина в тромбин под влиянием активного комплекса протромбокиназы. В основе превращения протромбина лежит расщепление его молекулы на фракции, одна из которых с молекулярной массой 37 тыс. переводится фактором Ха в тромбин. Реакция требует наличия ионов кальция и ускоряется в присутствии фактора V и фосфолипида.

Фаза 3 - фибринообразование - состоит в превращении фибриногена в фибрин при участии тромбина. Тромбин отщепляет от фибриногена по два пептида А и В, что ведет к полимеризации оставшихся фибрин-мономеров с образованием фибрин-полимера, растворимого в мочевине.
Стабилизация молекулы фибрина происходит под влиянием активированного тромбином фактора ХIIIа и состоит в формировании поперечных глютамин-лизиновых связей между единицами фибрина, в результате чего образуется прочная (не растворимая в мочевине, монохлоруксусной кислоте и других растворителях) фибриновая сетка.

Наиболее общее представление о коагуляции дает время свертывания цельной крови. Простым и удобным является метод Моравица: на часовое стекло наносят каплю крови, взятой из пальца или мочки уха, диаметром 4-6 мм. Тонким запаянным стеклянным капилляром проводят каждые 30 сек. по поверхности капли. Время свертывания определяют в момент появления первых фибриновых нитей, тянущихся за капилляром.

В методе Ли-Уайта используют венозную кровь. Пробирку с 1 мл венозной крови устанавливают на водяной бане при 37 °С и включают секундомер. Через каждые 30 сек. пробирку наклоняют под углом 45°. Время от момента взятия крови до появления сгустка является временем свертывания крови.

У здоровых людей время свертывания цельной крови составляет 5-8 мин.

Общую оценку конечного этапа свертывания крови дает тромбиновое время, т.е.
время свертывания цитратной плазмы крови под влиянием стандартной дозы тромбина.

Метод Сирман в модификации Рутберга: в пластиковую пробирку вносят 0,1 мл исследуемой крови, добавляют 0,1 мл подогретого до 37 °С изотонического раствора хлорида натрия и инкубируют смесь в течение 60 сек. при 37 °С. Затем вносят 0,1 мл стандартизированного раствора тромбина (раствор тромбина такой активности, который в смеси с равным объемом донорской плазмы вызывает свертывание последней за 15 с), включают секундомер и отмечают время свертывания плазмы крови. В норме тромбиновое время равно 14-16 сек.

Метод определения фибриногена по Рутбергу. К 1 мл плазмы крови добавляют 0,1 мл 5%-ного раствора хлорида кальция и 0,1 мл раствора тромбина (активность - 15 сек.). Образовавшийся сгусток переносят на обеззоленный бумажный фильтр и просушивают другим фильтром до сухого состояния. Взвешивают сухой фибрин на торсионных весах. В норме масса сухого фибрина - 9-12 мг. Для расчета концентрации фибриногена в плазме крови массу сгустка умножают на экспериментально установленный коэффициент 22,2. В норме концентрация фибриногена в крови равна 0,2-0,4 г в 100 мл.

Для выявления заблокированных продуктов деградации фибриногена (ПДФ) и фибрин-мономеров, что характерно для диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС-синдром), применяют так называемые паракоагуляционные пробы (этаноловую, протамин-сульфатную, b -нафтоловую) и тесты с протеазами из некоторых змеиных ядов.

Тест на толерантность плазмы к протамин-сульфату. В 1-й пробирке проводят определение времени свертывания цитратной плазмы крови под влиянием тромбина (тромбиновое время), во 2-й - то же определение, но после добавления равного объема (0,1 мл) 0,01%-ного раствора протамин-сульфата. Разница во времени свертывания плазмы крови в 1-й и 2-й пробирках в норме составляет 7-10 сек. Увеличение этой разницы (более 7-10 сек) свидетельствует об увеличении в крови гепарина (протамин-сульфат обладает способностью связывать свободный гепарин) и других антитромбинов.

Если конечный этап свертывания не нарушен (тромбиновое время нормально), то раздельно оценивают внешний и внутренний механизмы активации свертывания (формирование протромбиназы, трансформирующей протромбин в тромбин). Внешний механизм суммарно оценивают с помощью теста протромбинового времени по Квику (времени свертывания рекальцинированной цитратной плазмы при добавлении к ней тканевого тромбопластина стандартизированной активности).

Метод Квика В пробирку вносят 0,1 мл испытуемой плазмы крови, 0,1 мл суспензии тромбопластина (активность тромбопластина тестируется на нормальной донорской плазме), ставят в водяную баню при 37 °С на 60 сек. Затем приливают 0,1 мл 0,025 М хлорида кальция и включают секундомер. Отмечают время свертывания крови. Опыт повторяют 2-3 раза и определяют средний показатель.

Протромбиновое время при стандартизированном тромбопластине в норме составляет 12-15 сек. Поскольку могут быть отклонения в активности отдельных серий тромбопластина, то прибегают к вычислению протромбинового индекса по формуле:

Где А - протромбиновое время плазмы крови донора;В - протромбиновое время исследуемого лица.

В норме этот показатель равен 80-100%.

При нормальном тромбиновом времени нарушения внешнего механизма могут быть обусловлены дефицитом факторов VII, Х, V или II, поскольку все они определяются протромбиновым временем. При нормальном тромбиновом и протромбиновом времени нарушения внутреннего механизма свертывания зависят только от факторов ХII, ХI, IХ и VII. Для оценки внутреннего пути активации свертывания крови используют общие коагуляционные тесты: время свертывания цельной крови, парциальное (частичное) тромбопластическое время (или каолин-кефалиновое время), аутокоагуляционный тест.

Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) - время рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы крови в стандартных условиях, создаваемых внесением каолина - активатора ХII фактора и кефалина - аналога 3-тромбоцитарного фактора, для исключения влияния тромбоцитов на результат исследования (метод Proctor с соавт.). В пластиковую пробирку вносят 0,1 мл бедной тромбоцитами цитратной плазмы, 0,1 мл каолин-кефалиновой суспензии, смешивают и инкубируют при 37 °С в течение 3 мин. Добавляют 0,025 М хлорида кальция равного объема (0,1 мл), подогретого до 37 °С, и включают секундомер. Отмечают время образования сгустка. В норме активированное частичное тромбопластиновое время составляет 30-40 сек.

Аутокоагуляционный тест (АКТ) (по Беркарда с соавт.). Стандартизация фосфолипидной и контактной активации начальной фазы процесса свертывания осуществляется добавлением к рекальцинированной плазме крови гемолизата эритроцитов исследуемого больного (аутотест).

По данным, полученным через 2-6-8-10-20-30-40-50-60 мин после добавления гемолизат-кальциевой смеси, строят график, восходящая часть которого отражает динамику нарастания активности тромбопластина и тромбина, нисходящая часть - скорость инактивации тромбина за счет антитромбинов и продуктов фибринолиза.

Коагулограмма.

Наиболее часто применяемые тесты для исследования гемостаза:

1. Время свёртывания венозной крови по Ли-Уайту – это время образования сгустка в одном миллилитре нативной венозной крови больного в стеклянной пробирке при 37C в норме 5-8 минут. Это ориентировочный общекоагуляционный тест, т.е. характеризует систему свёртывания крови в целом при нормальных показателях этот тест даёт информацию о том, что ПТИ больше 30%, фибриноген больше 1 г/л.
2. Время рекальцификации плазмы – это время свёртывания плазмы больного (полученной из крови, стабилизированной раствором цитрата натрия) при добавлении к ней раствора хлористого кальция. В норме 120-150 сек. Это является ориентировочным общекоагуляционным тестом.
3. Активированное время рекальцификации – это время свёртывания плазмы больного (полученной из «цитратной» крови) при добавлении навески каолина (каолин – белая глина, это поверхностно-активное вещество, применяемый для контактной инактивации свёртывания с целью более точного выявления нарушений в фазах свёртывания крови) после рекальцификации добавлением хлористого кальция. В норме 60-80 сек. Является точным и чувствительным методом.
4. Определение содержания фибриногена по Р. Л. Рутбергу. Метод основан на рекальцификации одного миллилитра цитратной плазмы и взвешивании образовавшегося сгустка фибрина (после отжатия из него жидкой фазы). Вес такого сгустка в норме 9-18 мг., что по калибровочным кривым соответствует концентрации фибриногена 2-4 г/л.
5. Паракоагуляционные тесты (В – нафтоловый, этаноловый, протаминсульфатный) – выявляет наличие в крови больного РКМФ (растворимый комплекс мономеров фибрина – это комплекс мономеров и частичных полимеров (неполных), растворимых в воде, старое название флобриноген В ). Наличие РКМФ в крови говорит о возможности или присутствии тромбонов либо ДВС. К цитратной плазме больного добавляют соответствующий реактив (В – надолол, протаминсульфат или 50%-ы й этанол). При наличии РКМФ мономеры фибрина высвобождаются, действие свёртывающих компонентов плазмы полимеризует эти мономеры с образованием сгустка. В норме РКМФ в крови нет, поэтому в процессе теста сгусток не образуется.
6. Фибриноген В – это РКМФ. В норме отсутствует. При его наличии, выражаемом плюсами, имеется гиперкоагуляция, с возможным или явным тромбозом.
7. Протромбиновое время (синоним – протромбиновый индекс) – это время свёртывания цитратной плазмы после внесения в неё стандартного раствора тромбопластина и хлористого кальция. Характеризует активность VII, X, V, II факторов протромбинового комплекса, которые является витамин К - зависимым. Поэтому тест широко применяется для контроля терапии непрямыми антикоагулянтами (антивитаминами К). При применении высокоактивного стандартного тромбопластина результат выражают в секундах (в норме 12-15 с.), но в связи с несоответствием большинства отечественных тромбопластинов стандарту результат выражают относительно в процентах или единицах протромбинового времени плазмы. Норма 80-100% или 0,8-1,1. Выше 110% результат быть не может, иначе это ошибка лаборатории.
8. Активированное частично (парциально) тромбопластиновое время – АЧТВ и АПТВ – синоним каолин-кефалиновое время плазмы. Кефалин – взвесь фосфолипидов, необходимых для свёртывания крови. Так же как и каолин, кефалин применяется для сокращения свёртывания в тесте, следовательно, для стандартизации и повышения точности теста. В данном случае в цитратную плазму до рекальцификации вводят навеску каолина (каолиновое время 60-70 сек.) и кефалин (кефалиновое время (если вводят только кефалин) синоним парциальное тромбопластиновое время, норма 55-56 сек.). В норме АЧТВ (т.е. с добавлением каолина и кефалина) – 35-45 сек. Кефалин является заменителем тромбоцитарного фактора 3. Тест весьма чувствителен к плазменным дефектам (дефицит XII, XI, IX, VIII, а так же к избытку антикоагулянтов). При лёгкой гипокоагуляции АЧТВ – 50-60 сек., средняя – 80-90 сек., выраженная более 90 сек. При гиперкоагуляции АЧТВ – менее 30 сек.
9. Определение количества тромбоцитов в крови. В норме (180-320)*10^9/л. Считают в камере или в мазке.
10. Определение времени кровотечения (по методу Дьюка, Борхгревинна, Айви и др.). Это время кровотечения из раны на нож (прокол или небольшой разрез-царапина) при обычном венозном давлении или при накладывании на плечо манжетки, в которой создаётся давление 40 мм рт.ст. Норма до 5 минут (при накладывании манжетки до 8 минут). Характеризует суммарное состояние сосудисто-тромбоцитарного гемостаза.
11. Тромбоцитарное время свёртывания плазмы. Это время свёртывания нормальной плазмы при добавлении раствора тромбина в равных объёмах. Даёт представление о состоянии ___________ этапа свёртывания. В норме 14-16 сек. При гиперкоагуляции – укорачивается, при гипокоагуляции – удлиняется.
12. Аутокоагуляционный тест. 0,1 мл цитратной крови больного смешать с двумя мл 0,222% гипотонического раствора CaCl2 образуется гемолизат – кальциевая смесь, в которой начинается процесс активации протромбина и превращения его в тромбин. К плазме больного добавляют этот гемолизат в разные сроки (2-й, 4-й,6-й, 8-й, 10-й, 20-й, 30-й, 40-й, 50-й, 60-й минутах или чаще только на 8-й и 10-й минутах). Строят график, который показывает нарастание активности тромбопластина и тромбина, а так же скорость инактивации тромбина антитромбинами и продуктами фибринолиза.

Характеризует гипокоагуляцию в норме на 8-й и 10-й мин. 7-11 сек.

13 Антитромбин III – первичный антикоагулянт плазмы крови. Исследуемая плазма дефибринируеттся (прогреванием, змеиным ядом или другими способами), затем добавляют стандартное кол-во тромбина (можно добавлять активированный фактор Xа, который так же блокируется антитромбином III ,-это вариант метода). Смесь инкубируют при 37С, а затем тестируют на растворе фибриногена или адсорбированной плазме через каждые 3 мин. в течении 9 мин. Об уровне антитромбина III по ослаблению свертывающей активности тромбина (количественное определение по калибровочной кривой). В норме 90-100 %. Гепарин действует только в присутствии антитромбина III (при соединении с ним).

14 Толерантность плазмы к гепарину - это время свертывания цитратной плазмы при внесении в нее небольших количеств гепарина и последующей рекальцификации. В норме 5-7 мин. Это общекоагуляционный тест, но более чувствительно отражает наклонность к тромбообразованию, при этом тест менее 5 мин., что по-видимому связано со снижением антитромбина -III.

15 Ретракция кровяного сгустка - это часть жидкости, отжатой сгустком при сокращении от количества плазмы. В норме 65 – 85 %. Менее 65% - сгусток дряблый, более 65% - плотный. Тест весьма неточен, малоинформативен, зависит от качества стекла и других лаб. принадлежностей, а так же биохимических показателей крови.

16 Спонтанный фибринолиз - это кол-во эритроцитов, выпавших из сгустка в процессе ретракции и лизиса, т.е. «мера спонтанной разрушаемости сгустка» при инкубации 37С 2 часа, (можно 3 часа). Метод неточен, неверен, т.к. показано, что формирование осадка _____________ эритроцитов не связано с фибринолизом. В норме 10-20%

17 Эуглобулиновый метод определения фибринолитической активности (син-эуглобулиновый тест). Это время растворения сгустка эуглобулинов, осажденных из исследуемой плазмы уксусной кислотой и свертываемых хлористым кальцием (или тромбином). По способу Коваржика-Булука: в кислой среде при низкой температуре осаждается эуглобулиновая фракция(это плазминоген, его активаторы, факторы свертывания, фибриноген). В осадок выпадают ингибиторы фибринолиза в очень малом количестве. Эуглобулиновую фракцию растворяют, затем вызывают в ней свертывание (добавлением хлорида Са или тромбина), определяют время лизиса полученного сгустка при 37С. В норме 3-4 часа(2-4, в среднем 3 часа). При повышении фибринолитической активности лизис ускоряется, при дефиците плазминогена и его активаторов замедляется. Используется методика для определения активности фибринолитической системы.

18 Клинические пробы щипка, жгута, баночная проба Нестерова. Показывают состояние проницаемости сосудистой стенки под влиянием относительно дозированного воздействия (щипок кожи, наложение жгута на плечо, присасывающее действие «банки» при разряжении воздуха в ней). Дают грубую, но часто важную информацию о состоянии сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Результат оценивают по количеству петехий, появляющихся на исследуемом участке кожи после механического воздействия.

Однако в связи с тем, что в суспензии каолина отсутствуют фосфолипиды, его воспроизводимость существенно ниже АПТВ-теста. Каолиновый тест нецелесообразно применять для обнаружения каких-либо коагулопатий, однако тест пригоден для выявления ВА.

Принцип метода

Определяют скорость образования сгустка фибрина после рекальцификации смеси, содержащей цитратную БТП и каолин. Последний активирует коагуляционный фактор XII, поэтому его результаты отклоняются от нормы при недостаточности многих коагуляционных факторов (I, II, V, VIII, IX, X, XI, XII), наличии ингибиторов свертывания, а также у пациентов, применяющих антикоагулянты.

Реактивы и оборудование

• Суспензия каолина в буфере (рН 7,4).
• Раствор кальция хлорида (0,025 М).
• Коагулометр (при отсутствии коагулометра - водяная баня и секундомер).

Образцы крови для исследования Для выполнения теста используют БТП. Поскольку тест фосфолипид-зависимый, весьма важны правильные режим и время проведения центрифугирования. Для эффективного удаления тромбоцитов целесообразно использовать двойное центрифугирование образцов (подробнее см. приложение 3).

Техника выполнения

В кювете коагулометра (или пробирке при мануальной технике выполнения) смешивают 0,1 мл исследуемой БТП и 0,1 мл взвеси каолина. Затем инкубируют эту смесь при температуре +37 °С в течение 3 мин. После инкубации в кювету (или пробирку при мануальной технике выполнения) добавляют 0,1 мл раствора кальция хлорида, имеющего температуру +37 °С, в тот же момент включают таймер коагулометра (или секундомер при мануальной технике выполнения) и регистрируют время коагуляции.

Оценка результатов исследования

Каолиновое время свертывания оценивают в секундах. Необходимо определить время свертывания не только исследуемой БТП, но и контрольной нормальной плазмы. Нормативы существенно зависят от техники определения и варианта коагулометра, поэтому каждой лаборатории следует уточнить локальный диапазон нормальных значений.

Сравнивают результаты каолинового теста в исследуемой плазме с аналогичным показателем у здорового донора. Отклонением от нормы следует считать удлинение времени свертывания на 25 % от значения, полученного при исследовании контрольной БТП.

Интерпретация результатов исследования Пролонгированные показания в каолиновом тесте наблюдаются при снижении любого коагуляционного фактора, кроме факторов VII и XIII. Кроме того, этот тест отклоняется от нормы при наличии в крови различных ингибиторов коагуляции, в т. ч. ВА. Значительное удлинение в каолиновом тесте, а зачастую и несвертываемость обуславливает гепарин.

Укорочение времени коагуляции в каолиновом тесте часто обусловлено дефектами преаналитического этапа исследования.

Причины ошибок

• Ошибки преаналитического этапа исследования, в т. ч. неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.
• Дефекты центрифугирования при получении образцов БТП.
• Попадание в исследуемую кровь гепарина из венозного катетера.
• Гемолиз.

Другие аналитические технологии Существует вариант метода, оценивающий время коагуляции в богатой тромбоцитами плазме. Однако целесообразность его применения в повседневной диагностической практике вызывает сомнения.